白细胞介素1β诱导软骨细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的变化

摘要：

目的 检测白细胞介素-1β(IL-1β)诱导下哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在大鼠关节软骨细胞中表达变化.方法 无菌术下分离出大鼠关节软骨,采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶连续消化法提取细胞,二代软骨细胞经过3d预培养后,加入不同浓度IL-1作用24 h,通过甲苯胺蓝染色进行细胞表型鉴定后;用倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化;逆转录聚合酶链反应(PCR)检测软骨细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、mTOR以及核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(P70S6K)基因表达变化;酶联免疫测定mTOR信号通路相关蛋白表达变化.结果 随着IL-1β浓度的增加,软骨细胞表型出现由多角形变成梭形,PCR检测Ⅱ型胶原在各组中的相对表达量(对照组:0.821±0.014;1 ng/ml组:0.614 ±0.014;10 ng/ml组:0.549 ±0.009;100 ng/ml组:0.520±0.008)、蛋白聚糖(0.867±0.005;0.857±0.001;0.554±0.008;0.538±0.004)以及mTOR(0.845±0.015;0.785±0.009;0.569 ±0.025;0.518±0.014)的表达量减少,且各基因组组内表达差异均有统计学意义(均P ＜0.05);而P70S6K基因表达量(0.465 ±0.024;0.566±0.022;0.663 ±0.022;0.896 ±0.015)增加,各组表达差异均有统计学意义(均P＜0.05);免疫印迹检测mTOR蛋白以及P70S6K蛋白表达量与PCR检测趋势一致.结论 在软骨细退变过程中mTOR信号通路可能起着重要作用,通过调控mTOR信号通路可能延缓关节软骨退变.

关键词：软骨、关节、细胞衰老、白细胞介素1、蛋白激酶类、雷帕霉素

所属期刊栏目：97

分类号：R365;R776.1;R587.2

在线出版日期：2017-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：540-544