肝癌细胞HepG2与树突状细胞融合瘤苗体外免疫效应的实验观察

摘要：

目的 制备HepG2细胞与树突状细胞(DC)融合瘤苗,检测其体外诱导的特异性抗肝癌细胞HepG2的免疫效应.方法 以密度梯度离心法分离健康志愿者外周血中的单个核细胞(PBMC),以重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)体外诱导培养DC,同时利用重组人白细胞介素2(rhIL-2)培养获得同源T淋巴细胞;采用聚乙二醇(PEG)诱导DC和HepG2融合,免疫荧光染色观察融合细胞状态,并通过流式细胞术检测融合率;使用ELISA法检测融合细胞分泌白细胞介素12(IL-12)的能力,荧光衰减法检测融合细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力;采用ELISPOT法检测融合细胞诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)释放干扰素(IFN-γ)的能力;采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测融合细胞刺激产生的CTL体外特异性杀伤HepG2肝癌细胞的效果.以单纯DC、HepG2和DC混合细胞(mix DC,mDC)作为对照.结果 HepG2/DC融合瘤苗体外融合率为54.5％,融合瘤苗表面高表达DC成熟分子,分别为HLA-ABC 96.7％,HLA-DR 94.5％,CD80 93.2％,CD83 90.4％,CD86 95.1％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01);融合瘤苗刺激T淋巴细胞增殖能力显著强于对照组(P＜0.01),其分泌IL-12的水平也高于对照组(P＜0.05);融合瘤苗诱导的CTL分泌IFN-γ的能力显著增强,特异性CTL在效靶比为30:1和100:1时对HepG2的杀伤率为(31.4±2.4)％和(57.6±7.3)％,比对照组杀伤能力强(P＜0.01).结论 HepG2细胞与DC能够成功融合,融合细胞能够有效提呈HepG2抗原,诱导T淋巴细胞在体外产生针对HepG2细胞的特异性免疫反应.

关键词：肝癌细胞、树突状细胞、细胞融合、免疫治疗、肝细胞癌

所属期刊栏目：97

分类号：R735.7;R392.11;R285.5

在线出版日期：2017-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：535-539