血小板源性生长因子诱导下人抗原R对气道平滑肌细胞内转化生长因子β1表达的影响

摘要：

目的 探讨血小板源性生长因子(PDGF)诱导下人抗原R(HuR)对气道平滑肌细胞(ASM)内转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 体外培养ASM以PDGF(20 μg/L)分别在0、6、12和24h刺激ASM以诱导哮喘状态.实时荧光定量PCR检测各时间点细胞内HuR、TGF-β1mRNA水平,Western印迹法检测各时间点细胞内HuR、TGF-β1的蛋白水平.利用RNA干扰技术特异性阻断HuR表达,Western印迹法检测干扰组和对照组HuR及TGF-β1在PDGF刺激0、6和12 h的表达水平.酶联免疫吸附法检测干扰组和对照组在PDGF刺激0、6和12h后,细胞培养上清中TGF-β1的蛋白水平.将细胞依次分为对照组、对照+ PDGF 6 h组、干扰组及干扰+PDGF 6 h组,然后各组依次加入放线菌素D(10 mg/L)刺激0、4、8和12 h,检测各组TGF-β1 mRNA的半衰期.结果 PDGF刺激下HuR表达呈现明显的时间依赖性,0、6、12和24h细胞内HuRmRNA及蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.35±0.14、1.73±0.17、2.07±0.10及0.51±0.10、0.67±0.05、0.83±0.07、0.95±0.02(均P＜0.05).TGF-β1的mRNA及蛋白水平也呈时间依赖性,0、6、12和24h细胞内TGF-β1 mRNA及蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.27±0.06、1.60±0.10、1.87±0.10及0.72±0.09、0.87±0.07、1.13±0.12、1.33±0.05(6与12 h、12与24h两两比较,均P＜0.05).PDGF刺激0 h,干扰组与对照组HuR表达差异无统计学意义(P＞0.05),PDGF刺激12 h,干扰组HuR表达较对照组降低了21.9％ (P ＜0.05).对照组0、6、12 h TGF-β1蛋白相对表达量分别为0.70±0.05、0.89±0.06、1.06±0.05,而干扰组0、6、12 h TGF-β1蛋白相对表达量分别为0.67±0.09、0.77±0.03、0.89±0.05(与对照组相应时间点比较,均P ＜0.05).细胞培养上清TGF-β1含量对照组0、6、12 h依次为(773.33±16.32)、(877.97±16.03)、(3 060.34±82.53)ng/L,而干扰组0、6、12 h依次为(277.33±9.93)、(407.77±7.14)、(828.05±11.67)ng/L(与对照组相应时间点比较,均P＜0.05).放线菌素D刺激细胞,干扰组TGF-β1的RNA半衰期与干扰+PDGF 6 h组比较差异无统计学意义(P＞0.05),与对照组及对照+ PDGF 6 h组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 PDGF可上调ASM内TGF-β1表达,HuR通过增加mRNA稳定性参与PDGF诱导的哮喘状态下TGF-β1的表达过程.

关键词：肌细胞,平滑肌、气管、人抗原R、转化生长因子β1、血小板源生长因子

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资助基金：国家自然科学基金81370138National Natural Science Foundation 81370138

在线出版日期：2016-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3078-3082