BGC-823人胃癌细胞株SOX2基因的甲基化状态及其去甲基化的意义

摘要：

目的 观察BGC-823人胃癌细胞株中性别决定相关基因簇2(SOX2)启动子的甲基化状态,探讨SOX2基因去甲基化后对BGC-823细胞的生长和侵袭能力的影响.方法 通过甲基化特异性PCR法(MSP)检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2”-脱氧胞嘧啶(5-Aza-CdR)对BGC-823细胞SOX2启动子甲基化状态的影响,实时荧光定量PER及蛋白印迹法检测经不同浓度5-Aza-CdR作用前后BGC-823细胞中SOX2的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测存活率,Transwell小室法和划痕实验检测侵袭及转移能力变化.建立裸鼠BGC-823胃癌移植瘤模型,40只移植瘤小鼠平均分为2组,腹腔分别注射磷酸缓冲液(PBS)、5-Aza-CdR,通过免疫组化、蛋白质印迹法检测5-Aza-CdR的抑瘤效果.结果 5-Aza-CdR逆转了BGC-823细胞SOX2的甲基化状态,SOX2 mRNA表达恢复,且恢复表达程度与5-Aza-CdR药物浓度呈正比.BGC-823细胞SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量低于正常胃黏膜GES-1细胞”(22.80 ±0.36)和(0.49±0.01)比(20.36±0.45)和(0.91±0.28),均P＜0.05”,经系列浓度(0、1、10 μmol/L) 5-Aza-CdR处理后BGC-823细胞SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量相比差异均有统计学意义”(22.99±0.42)和(0.65±0.19)比(21.78±0.41)和(0.73±0.13)比(20.51±0.47)和(0.83±0.14),均P＜0.05”.经不同浓度(1、10、20umol/L)处理后,BGC-823细胞的增殖速度明显减慢,与浓度为0μmol/L的对照组比较,各处理组细胞存活率差异有统计学意义(P＜0.05),且迁移、侵袭能力减弱(均P＜0.05).裸鼠移植瘤结果显示:5-Aza-CdR组的最终肿瘤体积、最终瘤重较小”(286.6±37.5)mm3和(325.2±32.2)mg比(540.7士42.6)mm3和(694.7±36.1)mg,P＜0.05”,生存期较长”(22.5±1.0)比(18.7±1.6)d,P＜0.05”,SOX2蛋白表达量高”(0.96±0.25)比(0.73±0.15),P＜0.05”,免疫组化评分高”(6.23±0.45)比(3.76±0.43),P＜0.05”.结论 人胃癌BGC-823细胞株SOX2基因启动子处于甲基化状态,通过去甲基化作用能够恢复SOX2基因的表达,降低胃癌细胞的增殖和侵袭能力,抑制裸鼠BGC-823胃癌移植瘤的生长,为胃癌的治疗提供一种新思路.

关键词：胃肿瘤、SOX2启动子、5-氮杂-2”-脱氧胞嘧啶、去甲基化

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资助基金：福建省科技计划重点项目2014D017;福建省自然科学基金科技项目2015J01564,2016J01639;福建省医学创新课题2012-CXB-29;厦门市科技计划项目3502Z20134011Key Project of Science and Technology Project of Fujian Province2014D017;Science and Technology Project of Natural Science Foundation of Fujian Province2015J01564,2016J01639;Medical Innovations Topic in Fujian Province2012-CXB-29;Project of Xiamen Scientific and Technological Plan3502Z20134011

在线出版日期：2016-09-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2548-2553