携带p53基因的重组1型单纯疱疹病毒溶瘤特性的实验观察

摘要：

目的 利用同源重组技术获得插入p53基因的重组1型单纯疱疹病毒(HSV-1),并在体外培养细胞和荷瘤小鼠中研究其溶瘤特性.方法 将含p53基因的真核表达框克隆入含HSV-1同源重组臂的pKO5/BN,获得重组穿梭质粒pKO5/p53,其电转含pHSV△IR-BAC的大肠杆菌后,筛选获得含有p53的重组DNA pHSV△IR-BAC/p53.pHSV△ IR-BAC/p53转染Vero细胞获得重组病毒,经Southern印迹和Western印迹鉴定正确后命名为MH1004.分别检测MH1004感染多种肿瘤细胞24h后的滴度,分析其在肿瘤细胞中的复制特性.建立小鼠黑色素瘤模型,于0、3、6d瘤内分别注射2×106 PFU的MH1004、未插入p53基因的重组HSV-1(MH1001)、HSV-1 wt和PBS,观察肿瘤大小和小鼠生存时间并作统计学分析.结果 Western印迹检测表明MH1004所携带的p53基因可在感染细胞中表达;在同种肿瘤细胞中,MH1004和HSV-1 wt的复制水平差异无统计学意义(P＞0.05);MH1004在SK-N-SH和U251细胞中的复制水平显著高于其在其他肿瘤细胞中的复制水平;治疗15 d后,HSV-1 wt、MH1001和MH1004组小鼠的肿瘤体积分别为(6 180 ±751)、(5 760 ±267)和(4 850±532)mm3,显著小于PBS对照组(9 860 ±91) mm3(均P ＜0.01),MH1004组肿瘤体积小于MH1001组和HSV-1wt组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05).MH1004组小鼠生存率(5/6)显著高于PBS组(3/6)、HSV-1 wt组(3/6)和MH1001组(3/6).结论 MH1004在神经肿瘤细胞中的复制水平较高,能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,并延长荷瘤小鼠的生存期.

关键词：疱疹病毒1型,人、染色体,人工,细菌、基因,p53、溶瘤病毒

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资助基金：国家自然科学基金31140018;新疆维吾尔自治区高技术研究发展项目2010016 National Natural Science Foundation of China31140018;High-tech R&D Program of Xinjiang Uygur Autonomous Region of China2010016

在线出版日期：2016-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：370-374