PON1基因过表达对急性敌敌畏中毒小鼠膈肌细胞损伤的影响

摘要：

目的 观察对氧磷酶1(PON1)基因过表达对急性敌敌畏中毒所致小鼠膈肌细胞损伤的影响.方法 常规培养小鼠膈肌细胞,转染过表达慢病毒载体,将细胞分为正常对照组,敌敌畏(DDVP)组,LV-GFP+ DDVP组,LV-PON1+ DDVP组,CCK-8法检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞的凋亡情况、RT-PCR及Western印迹法检测小鼠膈肌细胞PON1和Nrf2mRNA及蛋白的表达情况、ELISA法检测细胞乙酰胆碱酯酶(AchE)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)水平,化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)水平.结果 0、80、160、320、640 μmol/L DDVP诱导小鼠膈肌细胞24 h后,细胞的生存率分别为(100±3.82)％、(82.13 ±2.60)％、(53.57±5.05)％、(30.77±3.30)％、(14.20 ±2.19)％,呈浓度依赖性;以160μmol／L DDVP分别诱导小鼠膈肌细胞0、6、12、24 h后,细胞的存活率分别为(100.17±2.74)％、(76.13±6.01)％、(66.53±3.55)％、(53.57±5.05)％,呈时间依赖性(P＜0.05).LV-PON1组细胞PON1蛋白表达高于空白对照组(0.370±0.015与0.232 ±0.004,0.197±0.015与0.037±0.003,P＜0.05).DDVP诱导后,不同时间点LV-PON1组细胞存活率高于DDVP组(P＜0.05).诱导24 h,LV-PON1组凋亡率及MDA含量低于DDVP组(P＜0.05).LV-PON1组AchE水平、PON1和Nrf2蛋白表达水平、SOD和CAT、HO-1和NQO-1水平均高于DDVP组(P＜0.05).结论 PON1基因过表达可以有效减轻DDVP对小鼠膈肌细胞AchE的抑制作用,可以诱导Nrf2的表达,发挥抗氧化作用,从而保护小鼠膈肌细胞.

关键词：有机磷、敌敌畏、乙酰胆碱酯酶、氧化应激

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资助基金：浙江省中医药重点学科建设计划2012-XK-A28;浙江省“十二五”高校重点学科建设计划,浙江省医药卫生平台骨干人才计划2012RCB036

在线出版日期：2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2955-2959