抑癌基因p14ARF对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响

摘要：

目的 探讨抑癌基因p14ARF对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 在不表达p14ARF的MG63细胞(p53突变)中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株MG63-ARF;经反向聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法鉴定;使用顺铂处理MG63和MG63-ARF细胞,通过MTT法测定细胞生长抑制和IC50;采用流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;采用免疫印迹检测p53、Bax、p21、Mdm2、Fas、Caspase-3、Caspase-9、PARP的表达;通过RNA干扰进行p53的表达沉默.采用Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理各组细胞,检测该作用是否依赖Caspase-9.结果 mRNA和蛋白水平,MG63和MG63-vec细胞未见p14ARF表达,MG63-ARF细胞可见p14ARF的高表达.经顺铂处理72 h后,细胞活力在MG63、MG63-vec和MG63-ARF组为84.2％±4.3％、80.8％±4.3％和58.9％±5.4％,IC50值为(11.1±0.6)、(10.7±0.9)、(7.2±0.7) μmol/L,(P＜0.05).流式细胞术显示MG63、MG63-vec和MG63-ARF组经顺铂处理72 h的凋亡率为:13.6％、18.5％和35.9％.荧光染色表明MG63-ARF细胞相对出现更多更明显的凋亡,在MG63-ARF还出现了更明显的Caspase-3,9和PARP的活化裂解.在顺铂处理的MG63-vec和MG63-ARF细胞中,p53、Bax、p21、Mdm2、Fas的表达无任何改变.在U2OS-vec和U2OS-ARF细胞中转染p53-siRNA明显减弱了p53的表达,再经顺铂处理72 h后,U2OS-vec细胞的转染空白组、转染对照siRNA组和转染p53-siRNA组细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05),U2OS-ARF细胞的转染空白组、转染对照siRNA组和转染p53-siRNA组细胞活力差异无统计学意义(P＞0.05).Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理后,Z-LEHD-FMK、顺铂、顺铂+Z-LEHD-FMK组细胞活力为:96.8％±3.6％、54.1％±5.8％和89.5％±5.1％.结论 p14ARF可通过p53非依赖Caspase-9依赖性途径增强顺铂诱导的骨肉瘤MG63细胞凋亡,该作用与内源性线粒体凋亡通路有关.

关键词：骨肉瘤、基因、抑制、肿瘤、顺铂

所属期刊栏目：95

分类号：R738.1;R285.5;R577

资助基金：广东省医学科研基金;广东省医学科研基金;广东省医学科研基金;江门市科技计划

在线出版日期：2015-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2875-2879