可溶性程序性死亡配体1对T淋巴细胞增殖的影响及机制

摘要：

目的 探讨可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)对人T淋巴细胞增殖的影响及其机制.方法 健康人外周血中分离得到T淋巴细胞,用植物血凝素(PHA)活化T淋巴细胞;实验分为5组:A:静止T淋巴细胞组、B:活化T淋巴细胞组、C:活化T淋巴细胞+ PD-L1融合蛋白(sPD-L1Ig)组、D:活化T淋巴细胞+ sPD-L1Ig+同型对照抗体(mIgG)组、E:活化T淋巴细胞+sPD-L1 Ig+鼠抗人程序性死亡配体1(PD-L1)阻断型抗体(2H11)组.通过细胞计数试剂盒(CCK-8法)测定各组T淋巴细胞的吸光度(A)值,流式细胞术检测sPD-L1对T淋巴细胞凋亡和细胞周期的影响,Western印迹法分析程序性死亡受体1 (PD-1)信号传导基序酪氨酸磷酸化程度,免疫沉淀技术进一步分析信号接头分子蛋白酪氨酸磷酸酶(SHP)-1和SHP-2的募集量,探讨sPD-L1激发PD-1抑制信号的机制.结果 CCK-8法体外实验结果显示:在sPD-L1Ig浓度为250 ng/ml时,A～E组A值分别为0.42 ±0.03、1.20±0.06、0.87 ±0.05、0.78±0.05、1.11±0.09;C组显著低于B组(=3.946,P=0.017),E组显著高于D组(t=3.139,P=0.035).A～E组G1期细胞百分比分别为(94.49±0.50)％、(79.22±0.50)％、(89.62±0.33)％、(92.89±0.80)％、(87.94±0.87)％,C组显著高于B组(t=17.310,P＜0.001).各组细胞凋亡率分别为(35.77±1.82)％、(35.20±2.70)％、(62.77±0.24)％、(64.47±0.44)％、(36.80±3.53)％;C组显著高于B组(t=10.160,P=0.001),E组显著低于D组(t=7.790,P=0.002).SHP-1、SHP-2在各组细胞中的表达量差异均无统计学意义(均P＞0.05).C组磷酸化SHP-1(p-SHP-1)、p-SHP-2表达量均显著高于B组(t=10.790,P＜0.001;t=13.051,P＜0.001);E组p-SHP-1显著低于D组(t=3.361,P=0.028).结论 sPD-L1可有效抑制T淋巴细胞的增殖,PD-1/sPD-L1的抑制信号可通过磷酸化SHP-1、SHP-2发挥作用,PD-L1阻断型抗体2H11可通过抑制p-SHP-1的表达部分恢复T淋巴细胞的增殖能力.

关键词：T淋巴细胞、细胞增殖、可溶性程序性死亡配体1、程序性死亡受体1、信号传导

所属期刊栏目：95

分类号：R729;R552;R6

资助基金：国家自然科学基金;苏州市科技发展计划

在线出版日期：2015-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：449-452