10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2014.26.012
大鼠羊水间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞定向分化的体外实验
目的:观察体外诱导大鼠羊水间充质干细胞( AF-MSCs )向Ⅱ型肺泡上皮细胞的定向分化。方法选取10只清洁级妊娠SD大鼠,收集羊水标本,分离、培养AF-MSCs,以流式细胞术分析其表型标记、实时荧光定量聚合酶链反应( qRT-PCR)检测Oct-4 mRNA表达(以大鼠胚胎干细胞作为阳性对照);根据不同体外诱导培养方法,将AF-MSCs分为A(空白对照组)、B、C、D、E共5组,各组体外不同诱导方法处理后qRT-PCR检测肺表面活性蛋白( SP) A、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA表达水平,免疫荧光法检测SPA、SPC蛋白水平以及电镜观察嗜锇性板层小体。结果大鼠AF-MSCs在含20%胎牛血清、4μg/L碱性成纤维细胞生长因子的L-DMEM培养基中呈旋涡状生长,第3代AF-MSCs表型标记中 CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和 CD166阳性表达率分别为(99.1±7.9)%、(99.2±7.4)%、(75.6±5.2)%、(98.9±8.1)%、(92.9±7.3)%和(89.3±6.7)%,而CD34和CD45表达阴性;Oct-4 mRNA相对表达量(0.690±0.059)显著低于大鼠胚胎干细胞阳性对照(1.000±0.002)(P<0.01);体外诱导分化后,A组SPA、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA及SPA、SPC蛋白均为阴性表达,而B组SPA、SPB、SPC、SPD和TTF1 mRNA相对表达量分别为0.426±0.043、0.368±0.028、0.492±0.058、0.327±0.024和0.183±0.018,均显著高于其他各组(均P<0.01),SPA、SPC蛋白绿色荧光呈强阳性表达;同时,在B组中观察到嗜锇性板层小体。结论 AF-MSCs在体外能通过特定的诱导定向分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞。
间质干细胞、肺泡、上皮细胞、细胞分化、大鼠
R16;R97
国家自然科学基金81000016;浙江省医药卫生科学研究基金2008B007
2014-08-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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