脂多糖预处理对人脐带间充质干细胞内毒素耐受的影响

摘要：

目的 观察脂多糖预处理对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)内毒素耐受的影响,并探讨其可能机制.方法 将hUCMSCs(1×104个/孔)分别暴露于0、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、40.0及50.0-μg/ml的脂多糖24 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;以1μg/ml脂多糖为预处理浓度,50 μg/ml脂多糖为诱导凋亡浓度,核因子(NF)-κB特异性抑制剂PDTC浓度为20 μmol/L,处理时间为20 min.使用Stata软件产生随机数字将hUCMSCs随机分为:对照组(A组);脂多糖诱导组(B组);预处理+脂多糖诱导组(C组);PDTC组(D组);PDTC+预处理+脂多糖诱导组(E组);预处理组(F组);PDTC+预处理组(G组).利用Hoechst 33258染色及流式细胞术观察细胞凋亡,Western印迹法检测NF-κB p65及细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白细胞介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)的表达.结果 0、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、40.0及50.0μg/ml脂多糖刺激组的细胞存活率分别为:100％、(117.0±8.8)％、(134.7±6.9)％、(105.3±8.3)％、(99.2±8.3)％、(84.2±9.3)％、(66.4±6.6)％和(59.2±8.0)％;与0 μg/ml组比较,1.0 μg/ml组hUCMSCs的存活率明显提高(P=0.004),而40.0、50.0 μg/ml组细胞存活率显著降低(P =0.005、0.002).A组hUCMSCs染色质分布均匀,为弥散均匀的低强度荧光;B组细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡细胞明显增多;C组凋亡细胞较B组显著减少.A、B、C、D、E各组细胞凋亡率分别为:(2.8±0.8)％、(29.7±3.4)％、(17.8±3.0)％、(2.9±0.4)％和(23.2±2.6)％;细胞凋亡率B组显著高于A组(P＜0.001),C组显著低于B组(P ＜0.001),E组显著高于C组(P=0.015).F组NF-κB p65、c-FLIP相对表达量(0.851 ±0.031、0.534±0.053)显著高于A组(0.220±0.021、0.049±0.009)(均P＜0.001)和G组(0.418 ±0.007、0.299 ±0.061) (P ＜0.001,P=0.007).结论 脂多糖预处理能够抵抗内毒素环境引起的hUCMSCs凋亡,增强细胞内毒素耐受性;其机制可能与激活NF-κB信号通路并上调c-FLIP的表达有关.

关键词：间质干细胞、脂多糖类、内毒素类、脐带

所属期刊栏目：94

分类号：R714.56;R329.24;R977.6

资助基金：国家自然科学基金81372052

在线出版日期：2014-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：948-951