启动子结合蛋白调节C3H10T1/2间充质干细胞的成骨机制

摘要：

目的 探究启动子结合蛋白(C/EBPα)对于间充质干细胞(MSC) C3H10T1/2细胞成骨调节的分子机制.方法 体外构建成骨分化模型,应用反向聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹检测C3H10T1/2细胞成骨分化时过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA和蛋白质的表达;通过构建干扰PPARγsiRNA的腺病毒载体及PPARγ拮抗剂G3335,观察PPARγ对于激活C/EBPα表达的作用.色质免疫沉淀分析(ChIP)检测PPARγ2位于C/EBPα启动子-1 286 bp/-1 065 bp区域内的结合位点并检测PPARγ与C/EBPα启动子-1 286 bp/-1 065 bp区段DNA甲基化和组蛋白高度去乙酰化的关系.结果 C3H10T1/2细胞在成骨分化时,PPARγ的mRNA和蛋白质的表达呈先升高后下降的双时相反应.siRNA和G3335引起的PPARγ活性的下调抑制了C/EBPα在C3H10T1/2细胞成骨分化时的上调(对照组6.1 mg/L,罗格列酮组13.0 mg/L,罗格列酮+G3335组11.0 mg/L,P＜0.05).DNA甲基化能减弱PPARγ2向-1 286 bp/-1 065 bp区段的结合能力.结论 C3H10T1/2细胞在成骨分化时,PPARγ通过结合至C/EBPα启动子-1 286 bp/-1 065 bp区段来促进该基因的表达,阻抑了PPARγ与之结合,与PPARγ相关的蛋白去乙酰化酶抑制得以解除,从而下调了-1 286 bp/-1 065 bp区段的组蛋白乙酰化,C/EBPα启动子促进C3H10T1/2细胞成骨过程.

关键词：骨生成、干细胞、过氧化物酶体类

所属期刊栏目：94

分类号：R318.08;R782.23;R587.1

在线出版日期：2014-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：227-231