血管内皮生长因子转染后脂肪组织来源干细胞蛋白分泌表达及成骨活性的检测

摘要：

目的 观察人血管内皮生长因子(VEGF)转染后的人脂肪组织来源干细胞(ADSCs)对VEGF蛋白的分泌和表达情况及转染后细胞的成骨活性变化.方法 胶原酶消化脂肪获取人ADSCs,经鉴定后进行培养传代.采用Trizol法获取编码人VEGF成熟肽的基因序列,将获得的目的基因VEGF与含绿色荧光蛋白的双顺反子表达载体连接成重组质粒pSELECT-GFP zeo-VEGF,分别转染第2、3、4、5代ADSCs.荧光显微镜下验证转染结果,酶联免疫(ELISA)检测转染后细胞的VEGF分泌.对第2代转染后的ADSCs于成骨条件下培养,检测上清液中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙蛋白(OC)的分泌.结果 脂质体介导的VEGF目的基因片段能够成功转染至体外培养的ADSCs;经ELISA定量检测,上清液中VEGF mRNA表达水平在转染组显著增高,对照组无明显变化.成骨条件培养下于转染后第3、5、7天ELISA检测人VEGF转染组对ALP (29.2±2.4)、(38.0±2.3)、(46.7±2.4) U/L(金氏单位)和OC的分泌量(13.2±1.6)、(18.3±1.6)、(25.3±1.5) μg/L以及实时聚合酶链反应(PCR)检测对ALP(0.1±0.0)、(0.2±0.0)、(0.3±0.0)和OC的分泌量(0.042 ±0.004)、(0.071±0.008)、(0.127±0.011)均明显高于空载体转染组及空白细胞组(P＜0.01).免疫印迹法检测人VEGF转染组中ALP/GAPDH和OC/GAPDH灰度比值明显高于空载体转染组和空白细胞组(P＜0.01).结论 经脂质体介导可成功将人VEGF目的基因片段转染至人ADSCs,并能够在体外持续有效地表达具有生物学活性的VEGF mRNA;转染后的ADSCs成骨定向分化能力明显增强.

关键词：血管、内皮生长因子、脂肪组织、干细胞、转染

所属期刊栏目：93

分类号：Q78;R730.2;R329.28

在线出版日期：2013-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1845-1849