干涉Gankyrin基因表达对小鼠乳腺癌转移的影响

摘要：

目的 建立稳定干涉癌基因Gankyrin的4T1-luc细胞株,探讨Gankyrin对小鼠乳腺癌转移的影响.方法 采用慢病毒感染和抗性筛选方法获得稳定干涉Gankyrin的乳腺癌细胞株4T1-luc/shGankyrin,通过蛋白质印迹和实时定量PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测Gankyrin的干涉效果；选用BALB/c小鼠进行4T1细胞原位种植,利用活体成像技术实时观测小鼠体内肿瘤生长和肿瘤转移情况,并对小鼠肺转移瘤进行病理学分析.结果 采用免疫印迹和实时定量PCR,检测稳定敲低Gankyrin 4T1细胞在蛋白质水平和mRNA水平的表达,均明显低于对照细胞,与对照细胞相比,不同干涉序列的4T1细胞mRNA水平分别为对照细胞的4.9％、25.1％、69.8％.利用活体成像进行细胞数与细胞发光强度的检测,选择细胞数与发光强度基本一致的#2细胞株进行小鼠原位种植,其产生的转移瘤进行实时观测,结果显示敲低Gankyrin的4T1细胞诱导的肺转移瘤荧光强度为3.02×106,而对照细胞为10.9×106,同时病理学证实了对照细胞产生的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阳性,而敲低Gankyrin的4T1细胞的肺转移瘤免疫组织化学Gankyrin染色阴性.结论 采用慢病毒感染的方法可以有效建立稳定敲低Gankyrin表达的细胞株；Gankyrin稳定干涉后对小鼠乳腺癌转移具有明显的抑制作用.Gankyrin有可能成为新的肿瘤治疗靶点.

关键词：慢病毒感染、肿瘤转移、Gankyrin

所属期刊栏目：93

分类号：R735.7;S828;R392.12

资助基金：国家自然科学基金31071234

在线出版日期：2013-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1099-1103