年轻与老年小鼠血管内皮细胞microRNA的差异表达

摘要：

目的 观察年轻与老年小鼠血管内皮细胞(EC) microRNA (miRNA)表达差异及意义.方法 原代分离并培养雄性C57BL/6J小鼠年轻和老年EC,免疫组化Ⅷ因子染色对EC进行鉴定,体外比较年轻和老年EC增殖速度,采用miRNA基因芯片分析年轻与老年EC内miRNA表达差异谱,荧光定量PCR(qRT-PCR)进行验证.免疫印迹(Western blot)检测EC内皮细胞型一氧化氮合成酶(eNOS)表达.结果 免疫组化Ⅷ因子染色证实原代分离的细胞为EC；在0.5％、1％、5％、10％、20％血清浓度下,MTT比色法测得年轻EC的吸光度值(A值)分别为0.260±0.006、0.350±0.011、0.404 ±0.027、0.519±0.034、0.590±0.040；老年EC的A值分别为0.360±0.011、0.480±0.019、0.532±0.025、0.641±0.036、0.710 ±0.038,发现老年EC增殖速度比年轻EC快(P＜0.05)；排除性别差异,经miRNA基因芯片,qRT-PCR证实miR-135a、miR-182、miR-96、miR-31、miR-126-3p和miR-362-5p在年轻EC表达上调(表达差异倍数分别为34.5±1.8、5.4±1、12.8±1、3.1±0.6和14.5±1.1),miR-335-3p和miR-335-5p在老年EC表达上调,表达差异倍数分别为3.3±0.6和2.1±0.3；其中,老年EC内miR-335-3p的上调,年轻EC内miR-135a,miR-96上调可能与老年EC内eNOS表达降低相关.结论 随年龄增长,EC的miRNA发生变化,调节EC内的基因表达,与衰老相关.

关键词：老年、血管内皮细胞、microRNA、内皮细胞型一氧化氮合成酶

所属期刊栏目：92

分类号：R2(中国医学)

资助基金：国家自然科学基金81070257;教育部留学回国启动基金教外司留《2010》609号

在线出版日期：2012-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2205-2209