外用广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂抑制小鼠变应性接触性皮炎的激发

摘要：

目的 研究外用广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂苄氧羰基-缬氨酰-丙氨酰-门冬氨酰氟甲基酮(Z-VAD-FMK)对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)激发阶段的抑制作用,探讨其对T细胞的作用.方法 以2,4二硝基氟苯(DNFB)制作小鼠经典ACD模型,于激发前外用不同浓度的Z-VAD-FMK,以耳肿度、双耳重量之差及组织切片中同一位置双耳双面距离之差为指标,观察Z-VAD-FMK对小鼠ACD激发阶段的抑制作用；以酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠耳皮损中T细胞因子干扰素γ(INF-γ)及白细胞介素2(IL-2)的含量,以实时反转录PCR( real-time RT-PCR)方法检测上述因子mRNA水平(实验结果以“相对于每百万管家基因的拷贝数”表示)；进行局部淋巴结分析(LLNA),以5-溴脱氧尿核苷(BrdU)-流式细胞术检测耳引流淋巴结中淋巴细胞增殖活性,以流式细胞术检测淋巴细胞表面活化标记.结果 1.25 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳肿度为(12.6±1.2)×10-2 mm,双耳重量差为(3.1±0.2)mg,镜下双耳双面距离差为(12.1±1.1)×10-2 mm,均低于阴性对照组[(17.4±1.6)× 10-2mm,(4.2±0.3) mg,(16.7±1.5)×10-2mm;q =3.25、2.98、3.12,均P＜0.05].1.25 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳皮损中INF-γ与IL-2mRNA及蛋白的表达均低于阴性对照组[ INF-γ mRNA:152±12比220±15,IL-2 mRNA:96 ±8比156±11,q=3.15、3.42; INF-γ蛋白:(856±45) pg/ml比(1180±58)pg/ml,IL-2蛋白:(167±12) pg/ml比(225±16) pg/ml,q=3.11、3.14；均P＜0.05].1.25 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳引流淋巴结中T细胞内掺入的BrdU的平均荧光强度明显低于阴性对照组(185±15比298±21,q=3.02,P＜0.05),T细胞3种表面活化标记CD69、CD25与Ia阳性细胞的百分率亦均明显低于阴性对照组(7.8％±0.7％比10.5％±1.0％,9.8％±0.8％比14.5％±1.1％,31.2％±2.8％比46.5％±3.2％,q =3.16、3.52、3.11,均P＜0.05).结论 在小鼠ACD激发前外用广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK可以抑制小鼠皮损局部及耳引流淋巴结中T细胞的增殖与活化,从而抑制小鼠ACD的发生.

关键词：皮炎、变应性接触性、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶、酶抑制剂、模型、动物、T细胞增殖、T细胞活化

所属期刊栏目：92

分类号：R722.12(儿科学)

资助基金：山东省自然科学基金ZR2011HQ056

在线出版日期：2012-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1992-1996