10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2012.10.019
低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响
目的 探讨氯化钴( CoCl2)诱导的化学低氧预处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移能力的影响.方法 采用全骨髓细胞贴壁法分离培养BMSC,流式细胞仪检测其表面标志物( CD29、CD90、CD45)鉴定BMSC;分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪,检测不同CoCl2浓度(0、50、100、150、200、300、400、600 μmol/L)和不同时间(0、6、12、24、48、72 h)培养条件下BMSC的增殖和凋亡情况,确立CoCl2化学低氧预处理BMSC的实验模型;细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测低氧预处理对BMSC迁移能力的影响;Western印迹法和实时定量PCR检测低氧预处理后BMSC的低氧诱导因子(HIF) -1α和CXC趋化因子受体4(CXCR4)蛋白及mRNA的表达;运用siRNA技术沉默HIF-1α基因以及使用CXCR4抑制剂AMD3100,观察预处理后BMSC迁移能力变化.结果 培养的BMSC呈现CD29和CD90高表达,CD45低表达;CoCl2浓度200 μmol/L、培养时间24h为本研究BMSC化学低氧预处理的实验模型;通过细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验发现,低氧预处理组BMSC的细胞迁移能力强于常氧培养组[划痕试验:(0.396±0.018)mm比(0.200±0.011)mm,Transwell细胞迁移实验:21.0±4.5比8.5±1.7,均P<0.05];低氧预处理组HIF-1α及CXCR4的蛋白及mRNA表达明显高于常氧培养组(P<0.05);低氧预处理组BMSC HIF-1α基因沉默后或经AMD3100处理后细胞迁移能力与常氧培养相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 CoCl2诱导的化学低氧预处理可促进BMSC的体外迁移能力,其机制可能与低氧预处理后HIF-1α表达上调进而介导CXCR4在BMSC表达增加有关.
间质干细胞、细胞低氧、细胞运动、低氧诱导因子、受体、趋化因子
92
R-33(医学研究方法)
2012-06-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
709-713