用于分子影像学研究的双融合报告基因表达载体的构建及功能验证

摘要：

目的 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人转铁蛋白受体(TfR)双融合报告基因表达载体,并进行功能鉴定,为活体光学/磁共振双模式成像提供实验基础.方法 将TfR基因克隆到pEGFP-C1载体,构建重组pEGFP-C1 -TfR质粒.pEGFP-C1 -TfR质粒转染293T细胞48 h后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达情况；通过RT-PCR检测TfR的表达情况；通过激光共聚焦扫描显微镜检测EGFP-TfR融合蛋白的亚细胞定位；通过Tf探针摄取和竞争实验检测EGFP-TfR融合蛋白的功能.结果 测序结果显示,EGFP-TfR基因序列正确,无突变或缺失.重组质粒转染293T细胞后,荧光显微镜下观察到EGFP的表达；RT-PCR结果显示TfR高效表达；EGFP-TfR融合蛋白主要位于细胞膜,并能够特异介导Tf的内吞.结论 EGFP-TfR双融合报告基因表达载体构建成功,并且能够高效表达发挥各自的功能,可以用于后续的活体光学/磁共振双模式成像.

关键词：磁共振成像、基因,报告、重组融合蛋白质类

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资助基金：国家自然科学基金81071206,81070349,81101096,81172193;NSFC-广东联合基金U1032002;部属管医院2010-2012年度临床学科重点项目164

在线出版日期：2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3363-3366