小干扰RNA沉默组织因子基因对肝癌侵袭转移能力的影响

摘要：

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人类肝癌细胞内组织因子(TF)基因表达，从而探讨对其侵袭转移能力的影响。方法 本实验以人类肝癌细胞系HepG2细胞株为实验对象，将携带有针对TF小干扰RNA( siRNA)序列的质粒pGPU6/GFP/Neo-TF siRNA，转染HepG2细胞株，以适当浓度的G418筛选获得阳性克隆，通过RT-PCR和蛋白质印迹法比较转染TF siRNA(+)质粒、转染TF siRNA( -)质粒以及未转染任何质粒的HepG2细胞内源性TF在基因及蛋白质表达水平的差异，进而应用Transwell体外侵袭实验检测三者的侵袭转移能力，探讨TF对肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。结果 (1) RT-PCR结果 显示，转染TF siRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF表达水平低于转染TF siRNA（-）质粒和未转染质粒的表达水平。(2)蛋白质Western印迹法结果 显示，转染TFsiRNA(+)质粒的HepG2细胞其内源性TF蛋白表达水平低于转染TF siRNA( -)质粒和未转染质粒的表达水平。(3) Transwell体外侵袭实验结果 显示，转染TF siRNA(+)质粒的HepG2穿膜细胞数[(14±10)个]少于转染TF siRNA（-）质粒的HepG2穿膜细胞数[(128±18)个]，经t检验比较，两组差异有统计学意义（P＜0.05）。这提示应用RNA干扰技术抑制肿瘤细胞TF表达可以使HepG2细胞侵袭转移能力显著下降。结论 TF与肝癌细胞的侵袭转移能力密切相关，应用RNA干扰技术抑制其表达可以明显降低细胞HepG2体外侵袭转移能力。

关键词：肝肿瘤、凝血致活酶、RNA干扰、肿瘤转移

所属期刊栏目：91

分类号：R4(临床医学)

资助基金：广东省自然科学基金10151008901000159;广东省科技计划项目基金2008B030301051

在线出版日期：2011-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2497-2500