大鼠终板软骨内源性转化生长因子β1与早期钙化相关基因表达的变化

摘要：

目的 建立大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型,探讨自然退变过程中内源性转化生长因子(TGF)-β1与钙化基因表达变化的关系.方法 取大鼠腰椎终板软骨细胞,酶消化法及自然传代法分离培养大鼠终板软骨细胞,选取P2代和P4代,在体外均培养6 d,观察细胞表型及利用茜素红染色,观察P2与P4代细胞的变化.用实时PCR检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX-9及代谢相关基因蛋白多糖、基质金属蛋白酶(MMP)-13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTD)4、5的变化,验证体外退变模型的建立,在此基础上,继续检测生长因子TGF-β1及钙化相关基因(ANK)、胞外核苷酸焦磷酸酶(ENPP)、组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)的变化.结果 相对于P2代细胞,P4代细胞形态上有梭形变趋势,茜素红染色无明显变化.P4代转录因子SOX-9表达明显低于P2代(P4/P2=0.0690,P=0.0489),Ⅱ型胶原(P4/P2=0.0535,P=0.009)及蛋白多糖(P4/P2=0.2672,P=0.0343)表达也均明显低于P2代,其他代谢相关基因无明显改变.P4代细胞TGF-β1(P4/P2=0.5934,P=0.0482)、TNAP(P4/P2=0.0385,P=0.0139)和ANK(P4/P2=0.2121,P=0.0009)表达均明显低于P2代,ENPP表达无明显改变(P＞0.05).结论 终板软骨随着传代次数增多,从P2代到P4代,开始发生体外自然退变,Ⅱ型胶原、SOX-9及蛋白多糖明显下调.内源性TGF-β1与钙化相关基因表达均下调,钙化相关基因ANK下调可能由内源性TGF-β1下调引起,提示调节内源性TGF-β1在终板软骨中的表达有可能会阻止椎间盘的退变.

关键词：软骨细胞、转化生长因子β、锚蛋白类

所属期刊栏目：91

分类号：R575.2(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金30973025;安徽省教育厅自然科学基金KJ2010A320

在线出版日期：2011-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2181-2185