多基因修饰骨髓间充质干细胞分化为胰岛素分泌细胞的实验观察

摘要：

目的 观测胰岛素转录调控因子PDX-1、NeuroD1及MafA对小鼠骨髓间充质干细胞(mMSC)分化为胰岛素分泌细胞的作用.方法 分离培养扩增mMSC,全基因合成转录因子PDX-1、NeuroD1和MafA的碱基序列,构建含目的 基因的腺病毒载体并转染293A细胞包装成功后,分别或联合感染mMSC,体外培养分化后反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰岛素基因的转录,免疫荧光鉴定胰岛素蛋白表达,ELISA检测细胞上清液胰岛素的分泌情况.结果 成功构建分别含目的 基因的3种腺病毒载体,导入转录调控因子的mMSC启动胰岛素基因转录,体外培养分化后可见胞质内有胰岛素合成,3种转录因子联合作用的mMSC经葡萄糖刺激后培养液上清胰岛素浓度为(112.84±9.67)mU/L,而未受染mMSC细胞上清液为(1.60±0.22)mU/L,二组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 转录因子PDX-1、NeuroD1和MafA修饰的mMSC能启动内源性胰岛素基因转录,获得显著产胰岛素功能.

关键词：胰岛素、转录因子、β细胞、骨髓间充质干细胞

所属期刊栏目：91

分类号：R587.1(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金81070654

在线出版日期：2011-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2148-2152