RNA干扰环氧合酶2对人腰椎退变终板软骨细胞生长增殖及凋亡的影响

摘要：

目的 观察沉默环氧合酶2(COX-2)基因对人腰椎退变软骨终板细胞增殖、凋亡的影响.方法 根据COX-2mRNA的序列,分别设计合成4对不同的且能干扰COX-2基因表达的siRNA并筛选出最高效抑制序列,构建以COX-2基因为靶点的RNA干扰质粒并将其转染腰椎退变软骨终板细胞.分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(30 nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(15 nmol/L COX-2 siRNA)和siRNA2组(30 nmol/L COX-2 siRNA).siRNA转染48 h后,采用荧光定量PCR法检测COX-2基因表达;WST-8检测细胞增殖情况;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测细胞凋亡相关基因survivin、bcl-x1、bax基因表达的情况.结果 构建的4组重组体插入片段的碱基序列完全正确.转染COX-2siRNA 48 h后人腰椎退变软骨细胞中COX-2mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为(1.3±7.2)%和(35.4±3.6)%,均显著低于空白对照组(100±5.7)%和阴性对照组siRNA(83.4±2.8)%,P＜0.05.免疫印迹实验显示COX-2蛋白表达量明显下降,以siRNA2组表达量最低(P＜0.05＝.WST-8法检测显示4组细胞存活率分别为(100.0±8.3)%、(84.9±4.2)%、(52.5±6.7)%、(48.9±5.4)%,siRNA1组和siRNA2组与其他各组相比,差异有统计学意义(P＜0.05＝.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测显示,随着转染浓度的递增,退变软骨细胞中survivin、bcl-2基因表达较对照组显著降低,bax基因表达则较对照组逐渐升高.结论 RNA干扰COX-2基因能明显抑制人腰椎终板软骨细胞COX-2的表达,抑制细胞生长增殖,并可通过下调抗凋亡基因survivin和bcl-2的表达,上调促凋亡基因bax的表达,从而诱导退变软骨终板细胞凋亡.

关键词：关节疾病、软骨细胞、软骨

所属期刊栏目：91

分类号：R6(外科学)

资助基金：上海交通大学医学院科技发展基金09XJ21048;上海市卫生局青年科技项目2009Y037

在线出版日期：2011-06-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1031-1035