渗透压反应增强子结合蛋白对高渗下人气道上皮细胞黏液分泌的影响

摘要：

目的 探讨高渗刺激下渗透压反应增强子结合蛋白(OREBP)对热休克蛋白(HSP)70的转录调控及对黏液分泌的影响.方法 采用体外堵养的人气道上皮细胞HBE16为实验对象,分时程施加高渗条件,Western印迹检测OREBP和HSP70-2蛋白水平,ELISA检测培养上清黏蛋白(MUC)5AC分泌;进一步构建系列截短和定点突变的HSP70-2启动子荧光素酶报告基因质粒,将其与OREBP的小片段干扰RNA(siRNA)共转染HBE16细胞,求证渗透压反应增强子(ORE)在HSP70-2基因启动子上游的结合位点及对MUC5AC分泌的影响.结果 600 mOsm/L高渗盐水培养HBE16细胞3 h后,OREBP、HSP70-2和培养上清MUC5AC蛋白相对含量分别为(0.54±0.07,0.20±0.08,0.17±0.04),与对照组(0.21±0.05,0.15±0.06,0.13±0.04)相比显著增加到2.57、1.33和1.31倍(均P＜0.05),且随高渗培养时间延长而增加,6 h时分别增加到2.81、3.07、3.77倍(均P＜0.01),9 h时分别增加到3.57、5.13、4.00倍(均P＜0.01),12 h时分别增加到4.24、5.33、4.54倍(均P＜0.01);siRNA抑制OREBP表达48 h后,高渗刺激下的0REBP、HSP70-2和上清MUC5AC蛋白相对含量为(0.36±0.08,0.33±0.08,0.24±0.05),和对照组(0.95±0.27,0.75±0.22,0.58±0.22)相比显著减少(蛋白抑制率分别为62%、56%和59%)(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);荧光素酶测定表明HSP70-2启动子上游-353至-66区域存在一个关键的ORE位点;定点突变失活-93区域的0RE位点可引起高渗诱导条件下HSP70-2启动子的活性显著降低(P＜0.01).结论 高渗盐水诱导OREBP通过与HSP70-2启动子上-93位ORE结合而激活HSP70-2转录并促进HBE16细胞MUC5AC高分泌.

关键词：渗透压、载体蛋白质类、HSP70热休克蛋白类、黏蛋白类

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分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30770951;国家自然科学基金中俄国际合作项目81011120108;中俄政府间科技合作项目2009:13-1

在线出版日期：2011-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：549-553