表达PTEN同时沉默Livin基因载体的构建和鉴定
目的 构建表达PTEN基因、同时又沉默Livin基因的复合载体,探讨调控PTEN和Livin基因对胃癌细胞的影响.方法 根据GenBank中人DNA的PTEN基因(NM_000314)和Livin(NM_139317)基因的全长序列设计,分别构建出表达PTEN基因的真核表达载体pCL-neo-PTEN和沉默Livin基因的siRNA载体pRNAT-U6.1-Livin.切下pRNAT-U6.1-siLivin中的Livin siRNA单元,将其重组入pCL-neo-PTEN;鉴定得到表达PTEN同时沉默Livin基因的重组载体pCL-neo-PTEN-siLivin.脂质体包裹3个重组载体分别转染胃癌BGC823细胞,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测胃癌BGC823细胞PTEN和Livin基因mRNA和蛋白表达情况.结果 经过限制性酶切和测序鉴定得到重组子pCL-neo-PTEN、pRNAT-U6.1-Livin和pCL-neo-PTEN-siLivin.转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞中PTEN基因mRNA(0.897±0.112)和蛋白高水平表达,与对照组细胞(0.277±0.036)比较差异有统计学意义(P<0.05),与转染pCL-neo-PTEN的比较差异无统计学意义(P>0.05);转染pCL-neo-PTEN-siLivin的胃癌BGC823细胞中Livin基因mRNA(0.071±0.009)和蛋白表达抑制,与对照组细胞(0.338±0.044)差异有统计学意义(P<0.05),与转染pRNAT-U6.1-siLivin的差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功构建出表达PTEN基因同时又沉默Livin基因的重组载体.
遗传载体、抑制蛋白类、癌基因、PTEN、Livin
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R3(基础医学)
2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
2428-2432
