先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8突变型和野生型在真核细胞中的蛋白表达

摘要：

目的 克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因GJA8,研究该基因野生型(wGJA8)和突变型(mGJA8)在体外真核细胞系中的表达.方法 以正常人类和家系患者基因组DNA为模板进行PCR扩增,分别调取wGJA8和mGJA8.构建质粒pEGFP-N1-wGJA8和pEGFP-N1-mGJA8,经双酶切测序鉴定后分别转染COS7细胞,用荧光显微镜观察蛋白表达情况,Western印迹和免疫组化法检测蛋白表达.结果 目的 基因wGJA8和mGJA8克隆成功,经双酶切和DNA测序证实质粒pEGFP-N1-wGJA8和pEGFP-N1-mGJA8构建成功.荧光显微镜观察到野生型蛋白和突变型蛋白在体外培养的COS7细胞内均有表达,Western印迹和免疫组化显示基因wGJA8和mGJA8在COS7细胞中均有蛋白表达.结论 成功克隆出该家系致病基因wGJA8和mGJA8,完成了致病基因在真核细胞中的蛋白表达,为进一步研究该家系白内障的确切发病机制奠定了基础.

关键词：先天性遗传性白内障、GJA8、突变型、CxS0

所属期刊栏目：90

分类号：R3(基础医学)

资助基金：黑龙江省博士后启动基金LRB-05-451;黑龙江省青年科学基金QC07C93

在线出版日期：2010-06-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1062-1066