用RNA干扰腺病毒载体研究Wnt/β-连环蛋白信号途径对人甲状腺细胞增殖的影响

摘要：

目的 以糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体作为研究工具,从转录后水平抑制GSK-3β基因表达,探讨Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对人甲状腺细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)腺病毒表达载体,在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞,Western印迹法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi腺病毒抑制GSK-3β表达,BrdU法检测原代培养人甲状腺细胞增殖活性.结果 成功构建了GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞后,GSK-3β蛋白的表达受到明显抑制,β-catenin蛋白表达显著增加(1.324±0.057 vs 0.935±0.029,P<0.05);腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞1、3、5、7 d后,RNAi腺病毒组比空病毒组细胞增殖率明显增加(1.473±0.035 vs 1.312±0.043、1.226±0.045 vs 0.959±0.066、0.776±0.041 vs 0.605±0.054、0.337±0.018 vs 0.259±0.021,P<0.05).结论 构建的目的RNAi腺病毒表达载体能有效抑制GSK-3β基因的表达;Wnt/β-catenin信号通路在人甲状腺细胞的增殖中有重要影响.

关键词：信号传递、人甲状腺细胞、增殖

所属期刊栏目：88

分类号：R5(内科学)

在线出版日期：2009-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2821-2825