shRNA抑制人骨髓间充质干细胞SMN1基因表达的研究

摘要：

目的 构建在哺乳动物细胞中表达SMN1 shRNA的质粒,并初步探讨其对人骨髓间充质干细胞全长SMN mRNA及蛋白的抑制作用,为进一步建立脊髓性肌萎缩症细胞模型提供实验依据.方法 根据GenBank中SMN1 cDNA序列设计5条SMN1靶向shRNA并将其克隆至pRNAT-U6.1/Neo载体中U6启动子的下游,形成能在细胞内表达SMN1特异性短发夹状RNA的重组质粒pshRNA-SMN1;在脂质体介导下将重组质粒pshRNA-SMN1转染人骨髓间充质干细胞(hMSC),RT-PCR、Western印迹分别检测fl-SMN mRNA及fl-SMN蛋白的表达.结果 琼脂糖凝胶电泳及DNA测序证实重组质粒pshRNA-SMN1构建成功,其中pshRNA-SMN1-1组和pshRNA-SMN1-4组转染后明显抑制了hMSCs fl-SMN mRNA及蛋白的表达(均P＜0.05),在mRNA水平上千扰效率分别为64.05%、61.04%,蛋白水平上千扰效率分别为52.97%和61.57%,而未影响△7-SMN mRNA的表达.结论 构建的pshRNA-SMN1重组质粒能有效地抑制人骨髓间充质干细胞fl-SMN mRNA及蛋白的表达.

关键词：肌疾病、萎缩症、RNA干扰、运动神经元生存基因、间充质干细胞

所属期刊栏目：87

分类号：R6(外科学)

在线出版日期：2008-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2369-2371