基质金属蛋白酶2靶向穿膜肽表征分析及体外显像研究
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10.3760/j:issn:0376-2491.2007.04.005

基质金属蛋白酶2靶向穿膜肽表征分析及体外显像研究

引用
目的 构建以基质金属蛋白酶2为靶点的穿膜肽,标记荧光素及顺磁性粒子,初步探讨体外成像价值.方法 固相合成基质金属蛋白酶2(MMP-2)为靶点的可活化穿膜肽(CPPs),标记荧光素FITC,构建荧光素分子探针A;标记磁共振对比剂二亚乙基三胺五乙酸钆(Gd-DTPA),构建磁共振分析探针B.高效液相色谱纯化探针及质谱测定分子量.聚丙烯酰胺等电聚焦电泳测定可活化穿膜肽的等电点.400 MHz磁共振谱仪翻转恢复序列测定磁共振探针B的自旋-点阵弛缓时间(T1);制备人肺癌细胞株A549爬片,FITC和荧光素分子探针A分别孵育细胞爬片30 min倒置荧光显微镜观察细胞内荧光分布;抗MMP-2单克隆抗体孵育细胞后,荧光素分子探针A孵育细胞后荧光显像及流式细胞分析细胞摄取的状况.明胶酶谱分析细胞表达MMP-2的情况;以A549为对象,120nmol/ml磁共振探针B和常规磁共振对比剂分别作用于细胞10、30、60、90 min后,1.5T MRI T1WI视觉评价法分析细胞内磁共振信号,并与空白细胞组比较,方差分析各组细胞信号变化特征.透射电镜分析磁共振探针B细胞内分布.结果 采用标准的芴甲氧羰基合成方案,质谱鉴定荧光素分子探针A分子量3789.74;磁共振分子探针B分子量3911.93.测定聚丙烯酰胺等电聚焦电泳目的条带pH值为11.005,即为可活化穿膜肽的等电点.17℃ 400 MHz磁共振谱仪测定浓度为0.5 mmol/L的GdDTPA与磁共振探针B去离子水溶液的纵向驰豫时间T1分别为0.052 s±0.01 s和0.050 s±0.001 s,两种配合物自旋-晶格驰豫效能分别为4.998 L·mmol-1·s-1及6.452 L·mmol-1·s-1.倒置荧光镜成像显示FITC作用细胞组内未见荧光素分布,荧光素探针A作用组A549细胞质和细胞核内出现明显得荧光素分布.抗MMP-2单克隆抗体孵育A549后,荧光摄取减少.以明胶酶谱分析细胞无血清培养基中MMP-2表达显示肿瘤表达酶原和活性酶两种形式.120 nmol/ml磁共振探针B和常规磁共振对比剂分别作用于A549 10、30、60、90 min后,MR FSE T1WI显示,磁共振探针B作用A549细胞组呈短T1高信号,Gd-DPTA作用组与对照组呈等T1信号.各组细胞组感兴趣区信号与背景信号比值的方差分析显示,磁共振分子探针B作用五组细胞信号间差异有统计学意义(F=267.569,P<0.001),两两组间信号差异也存在统计学意义(P<0.05),随着孵育时间增长,信号强度逐渐增强,到90 min时未见到明显饱和现象出现.Gd-DTPA作用细胞组信号与空白对照细胞组差异无统计学意义(P>0.05).透射电镜显像示磁共振探针作用的肺癌细胞株A549胞质及胞核里出现高电子密度的钆颗粒沉积,证实肿瘤细胞摄取磁共振探针B.结论以MMP-2为靶点的可活化穿膜肽,能够被活性基质金属蛋白酶激活,能够标记荧光探针和磁共振探针用于肿瘤细胞显像.

肽类、基质金属蛋白酶、造影剂

87

R4(临床医学)

高等学校博士学科点专项科研项目20060698049;西安交通大学校科研和教改项目dfxjtu2005-09

2007-03-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共7页

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0376-2491

11-2137/R

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2007,87(4)

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