腺病毒和慢病毒载体感染骨髓间质干细胞的比较

摘要：

目的 比较腺病毒和慢病毒载体感染骨髓间质干细胞(rMSCs)的荧光病毒基因表达的稳定性及持续时间.方法 将含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体质粒同辅助质粒一起共感染293T细胞,重组包装;将慢病毒和腺病毒载体分别感染rMSCs,培养5周,分别在1、3、5周通过流式细胞仪检测GFP的表达情况.从GenBank中调出人骨形态发生蛋白2(hBMP2)基因序列,设计带有Nhe Ⅰ、Age Ⅰ双酶切位点引物.从人肝脏组织中抽提总RNA,再逆转录成cDNA,扩增出hBMP2基因的全长序列.测序验证后克隆到慢病毒载体pHIV-CS-CDF-CG-PRE上,通过PCR扩增、酶切、测序等方法鉴定重组慢病毒载体.将该重组慢病毒载体质粒同辅助质粒一起共感染293T细胞,通过重组而包装成能表达hBMP2基因的有活性的慢病毒.结果 两种病毒载体感染后1周,绿色荧光蛋白表达分别是90%和71%,到5周时,慢病毒载体的绿色荧光蛋白表达明显高于腺病毒载体,分别是79%和0.05%.扩增出1.2 kb左右的hBMP2全长基因与GeneBank中的hBMP2阅读框架序列完全一致;成功克隆和构建了含hBMP2基因的慢病毒载体pHIV-hBMP2;对慢病毒载体进行了成功包装和分析.结论 含hBMP2基因的慢病毒载体可成功构建.慢病毒载体对大鼠骨髓间质干细胞的转染效率明显优于腺病毒载体.

关键词：慢病毒属、腺病毒科、干细胞、骨形态发生蛋白质类

所属期刊栏目：86

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30371434;上海市卫生局资助项目

在线出版日期：2007-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3340-3344