分泌人干扰素α-2a的重组卡介苗的构建、表达与鉴定

摘要：

目的 构建分泌人干扰素α-2a(IFNα-2a)的重组卡介苗(Rbcg).方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术从卡介苗基因组中扩增出Ag85B的信号肽基因序列,从pBIFNα-2a质粒中扩增出 IFNα-2acDNA全长序列.利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒Pmv261结核杆菌HSP60启动子下游,构建一个分泌型的卡介苗穿梭表达质粒pMSIFNα-2a.利用电穿孔技术将质粒pMSIFNα-2a转入卡介苗得到Rbcg,分别用PCR扩增和Western印迹检测Rbcg菌体和培养上清中IFNα-2a的DNA和蛋白表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Rbcg培养上清中IFNα-2a的含量.结果酶切鉴定、PCR扩增和DNA测序分析结果均表明,所克隆的信号肽DNA片段和IFNα-2a片段与文献结果完全一致,pMSIFNα-2a的连接方向正确,阅读框与预期完全一致.以Rbcg质粒DNA为模板,通过PCR扩增得到IFNα-2a的基因片段,Western印迹证实Rbcg分泌的蛋白能与人IFNα-2a的抗体特异性结合,ELISA法检测到Rbcg培养上清中高含量的IFNα-2a(324.57 pg/ml).结论构建的Rbcg能够分泌具有功能活性的细胞因子IFNα-2a,有望成为膀胱肿瘤免疫治疗的一种有效方法.

关键词：卡介苗、膀胱肿瘤、干扰素α-2a、RNA、信号肽

所属期刊栏目：86

分类号：R3(基础医学)

资助基金：上海市科委资助项目034119849

在线出版日期：2006-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2417-2420