体外RNA干扰下调ezrin表达对肝癌细胞生长和运动能力的影响

摘要：

目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白ezrin对肝癌生长和运动转移能力的影响.方法选取4株肝癌细胞系(SF/SMMC7721、MHCC97-H、 MHCC-1和HepG2)作为研究材料,针对ezrin基因设计小干扰RNA(siRNA)并通过脂质体转染入细胞.分别通过荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹验证siRNA对ezrin在基因和蛋白水平的下调及下调作用随转染时间的变化.根据Western印迹的结果选取ezrin蛋白表达最低的时间点检测干扰后肝癌细胞生物学行为的改变.运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测肝癌细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞周期;电子显微镜观察细胞伪足的形态和数量改变;transwell实验检测肝癌细胞运动和转移能力的变化.结果荧光实时定量PCR和Western印迹显示ezrin siRNA对ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用.下调ezrin蛋白可显著减慢4株肝癌细胞的生长速度,处于分裂期的肝癌细胞比例明显下降(SF/SMMC7721: 28.07%下降到21.53%;MHCC97-H: 24.94%下降到13.92%; MHCC-1: 19.30%下降到13.2%;HepG2: 7.73%下降到4.24%).肿瘤细胞的运动侵袭能力下降,细胞伪足变短,且伪足的形成数量显著减少(SF/SMMC7721: 20.8个/细胞±3.0个/细胞与13.2个/细胞±2.4个/细胞,P<0.05; MHCC97-H: 18.4个/细胞±2.7个/细胞与14.0个/细胞±2.9个/细胞,P<0.01;MHCC-1: 22.6个/细胞±3.5个/细胞与 13.3个/细胞±1.9个/细胞,P<0.01; HepG2: 31.0个/细胞±2.9个/细胞与17.8个/细胞±2.3个/细胞,P<0.01;每株计数5个细胞).穿过人工基底膜的细胞数量也明显减少(SF/SMMC7721: 49.9个±7.7个与31.9±5.2个,P<0.05; MHCC97-H: 58.5个±4.2个与33.0个±3.3个,P<0.01; MHCC-1: 57.6个±6.1个与28.3个±3.4个, P<0.01;HepG2: 37.3个±3.0个与25.3个±2.3个, P<0.01;每株8个视野).结论 ezrin在肝癌生长和侵袭转移过程中发挥重要的作用,有可能成为抑制肝癌复发转移的关键分子.

关键词：肝肿瘤、肿瘤转移、ezrin

所属期刊栏目：86

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：上海市科委资助项目044119650

在线出版日期：2006-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：530-535