核因子E2p45相关因子2基因在茶多酚调节结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A及其同工酶表达中的作用

摘要：

目的探讨核因子E2p45相关因子2(Nrf2)基因在茶多酚中的主要化学物质epigallocatechin gallate(EGCG)诱导结肠癌细胞尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A及其同工酶UGT1A8、UGT1A10表达中的调节作用.方法 EGCG分别作用Caco-2及HT-29结肠癌细胞12 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因表达水平的变化,免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜观察细胞内Nrf2蛋白定位的改变.此外,利用RNA干扰技术抑制细胞内Nrf2基因的表达,观察阻断前后EGCG对基因表达水平影响的改变.结果 (1)Caco-2及HT-29结肠癌细胞系、结肠癌及癌旁组织中UGT1A、1A8、1A10基因表达水平存在差异.(2)EGCG作用Caco-2及HT-29细胞后Nrf2、UGT1A、1A8、1A10表达升高1.8～9.2倍(均P＜0.05),免疫细胞化学及激光共聚焦显微镜检测到Nrf2蛋白向细胞核内聚集.(3)酶切分析和测序证实成功构建了RNA干扰真核表达载体pSilence-Nrf2-A、B、C、D及随机序列对照pSilence-CON.(4)pSilence-Nrf2-B质粒转染可显著抑制Nrf2基因的表达,在Caco-2及HT-29细胞中抑制率分别为81.46%±1.68%及84.72%±2.08%(实验重复3次);稳定筛选建立的Nrf2低表达的细胞系Caco-2-siNrf2、HT-29-siNrf2,不仅基础UGT1A酶的表达水平降低,而且EGCG作用后酶诱导表达的作用消失.结论 Nrf2基因参与了EGCG诱导UGT1A及其同工酶表达的过程并在其中起关键作用,为进一步论证EGCG在结肠癌化学预防中的作用及其可能的机制提供了新的论据.

关键词：结肠肿瘤、转录因子、葡萄糖醛酸转移酶、基因、Nrf2

所属期刊栏目：86

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目30370634

在线出版日期：2006-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：82-87