结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞转分化的调节机制

摘要：

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的直接影响,并探讨阻断内源性CTGF表达对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞转分化的干预效果,以阐明CTGF在肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HKC).在观察CTGF对HKC的直接作用时,将HKC细胞分为三组:(1)对照组;(2)小剂量CTGF组:培养液中加入重组人CTGF(rhCTGF),终浓度为2.5 μg/L;(3)大剂量CTGF组: rhCTGF终浓度为5.0 μg/L.在探讨CTGF在TGF-β1诱导HKC转分化中的作用时,将细胞分为4组:(1)正常对照组;(2)TGF-β1刺激组(培养液加入重组人TGF-β1蛋白,浓度为10.0 μg/L);(3)TGF-β1+CTGF正义寡核苷酸(ODN)组(先以CTGF正义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激);(4)TGF-β1+CTGF反义ODN组(先以CTGF反义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激).用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定HKC α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅳ型胶原(col Ⅳ) mRNA水平的变化;间接免疫荧光方法检测HKC 胞浆内α-SMA的表达;流式细胞仪检测α-SMA阳性细胞百分率; ELISA方法测定培养液上清中col Ⅳ的浓度.结果不同浓度rhCTGF作用于HKC 24 h后,α-SMA mRNA水平显著升高(P<0.01),而col Ⅳ mRNA表达水平明显下降(均P<0.01);刺激48 h后,胞浆α-SMA表达明显增强,流式细胞仪测得三组细胞α-SMA阳性百分率依次为:2.4%、38.9%、65.5% (P<0.01);ELISA结果表明,rhCTGF抑制了col Ⅳ的分泌(P<0.01).TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和α-SMA.转染后6 h,CTGF 反义ODN可显著抑制HKC表达CTGF和α-SMA mRNA(P<0.01).转染后48 h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内α-SMA蛋白合成.结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,而CTGF反义ODN的导入可有效抑制TGF-β1诱导的转分化过程.因此, CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子.

关键词：生长物质、肾小管、上皮细胞、肌动蛋白类、胶原

所属期刊栏目：85

分类号：R3(基础医学)

资助基金：湖北省科技攻关项目2003AA301C14

在线出版日期：2006-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2920-2925