串联表达大鼠心肌细胞Kir2.1 shRNA载体的构建及其体外效应

摘要：

目的构建串联表达5个针对大鼠kir2.1基因shRNA的真核表达载体,观察其对该基因表达的影响.方法选择5个针对大鼠kir2.1基因的RNA干扰位点,分别设计合成相应的5对寡核苷酸链,形成双链后分别连入带有U6启动子的相应载体,反复酶切连接将表达5个kir2.1 shRNA的目的基因依次连接入载体pEGFP6-1,构建成串联真核表达载体pEGFP6-1Kir2.1,将其转染培养的大鼠心肌细胞,RT-PCR和Western印迹检测其对Kir2.1 mRNA转录和蛋白表达的影响.结果成功构建串联表达5个大鼠Kir2.1基因shRNA的真核表达载体,该载体对大鼠心肌细胞Kir2.1mRNA转录的抑制率为83.5%,对心肌细胞Kir2.1蛋白表达的抑制率为68.1%.结论串联表达多个大鼠心肌细胞Kir2.1基因shRNA真核表达载体介导的RNA干扰可以特异性抑制该基因的表达,可能成为制造生物起搏器的一种新方法.

关键词：基因疗法、kir2.1基因、串联表达、RNA干扰

所属期刊栏目：85

分类号：R3(基础医学)

资助基金：中国科学院资助项目30471711

在线出版日期：2006-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2910-2915