缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1对缺氧诱导因子1α和p300在体外结合的影响

摘要：

目的探讨丝裂原活化的蛋白激酶磷酸酶1 (MKP-1)1α(HIF-1α)和p300在体外结合的影响.方法 采用DNA重组技术构建含HIF-1α反式激活域(TAD)的原核表达载体并进行原核表达;利用谷胱甘肽-琼脂糖珠子纯化原核表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)融合蛋白;利用脂质体将含MKP-1的正义真核表达载体和空载体转入SGC7901细胞;借助Pull-down试验和Western 印迹检测MKP-1或PD98059对HIF-1α与协同激活因子p300在体外结合的影响;Western印迹检测MKP-1对p300表达的影响.结果 (1)成功构建了含HIF-1αTAD的原核表达载体,使含HIF-1αTAD的GST融合蛋白在BL-21大肠杆菌中得到表达.(2)利用谷胱甘肽-琼脂糖珠子纯化得到了含HIF-1αTAD的GST融合蛋白.(3) 缺氧12 h后,GST融合蛋白HIF-1αTAD从PD98059处理细胞裂解液中洗脱的p300量低于从二甲基亚砜(DMSO)处理细胞和SGC7901细胞裂解液中洗脱的p300.(4)分别将MKP-1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC7901细胞;缺氧12h后,GST融合蛋白从MKP-1正义真核表达载体转染细胞(SGC7901-MKP-1)裂解液中洗脱的p300的量低于从空载体转染细胞(SGC7901-空载体)和未转染细胞(SGC7901)裂解液中洗脱的p300.(5)缺氧12 h后,p300的表达量在SGC7901-MKP-1、SGC7901-空载体和SGC79013组细胞中无变化.结论 MKP-1抑制HIF-1α和p300在体外结合.对缺氧诱导因子

关键词：细胞低氧、原核细胞、胃肿瘤

所属期刊栏目：85

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30400522

在线出版日期：2005-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2344-2348