乙型肝炎病毒X蛋白羧基端氨基酸缺失对肝癌细胞生物学行为的影响

摘要：

目的探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)羧基端缺失了40个氨基酸的突变体(HBx3′-40)和野生型HBx对Huh7和SMMC-7721肝癌细胞的生物学行为的影响.方法脂质体和磷酸钙法介导pcDNA3HBx3′-40和pcDNA3HBx重组体转染HBV(-)的人肝癌细胞Huh7和SMMC-7721.Neo基因PCR及Western印迹方法检测质粒DNA片断插入和HBx蛋白质的表达.借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期、凋亡和裸鼠成瘤实验以及氯霉素乙酰转移酶(CAT)-ELISA法对转染细胞的生物学活性进行检测.结果 pcDNA3HBx3′-40组细胞生长速度明显快于pcDNA3HBx和pcDNA3组;pcDNA3HBx3′-40组克隆形成率明显高于pcDNA3HBx和pcDNA3组(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示pcDNA3HBx3′-40表达能加速Huh7细胞由G0/G1期→S期的进程;但细胞凋亡检测显示无血清诱导的SMMC-7721细胞HBx3′-40组能部分取消HBx的促凋亡效应,并且该组几乎丧失了HBx的反式激活作用;裸鼠成瘤实验显示,pcDNA3HBx3′-40组成瘤体积明显大于pcDNA3HBx组和pcDNA3组,瘤体重量间差异具有统计学意义(P<0.05).表明HBx3′-40对肝癌细胞的生长具有明显促增殖作用.结论 HBx碳端缺失了40个氨基酸的突变体转染细胞对比野生型HBx显示促增殖能力明显增强,推测HBx通过缺失突变修饰其生物学功能,取消了野生型HBx的反式激活功能和抗增殖效应.另一方面,HBx 114～154个氨基酸位点的缺失可能导致p53无法发挥其抑癌作用.

关键词：癌、肝细胞、乙型肝炎病毒、重组、遗传

所属期刊栏目：85

分类号：R73;R58

资助基金：中国科学院资助项目30070344、30070839;第二军医大学校科研和校改项目

在线出版日期：2005-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：825-830