γ-GCS基因抑制元件E-box的实验研究

摘要：

目的明确大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位编码基因(GCLC基因)负调控区域(-745～-705)上的功能元件E-box作用.方法利用迁移率变动试验(EMSA)和超级迁移率变动试验证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E-box元件能与转录因子USF1/USF2特异性的结合;通过共转染USF1/USF2表达质粒(pCMV-USF1/ pCMV-USF2)和GCLC-luc确认E-box元件在基因调控中的作用;最后通过构建USF1/USF2的逆转录病毒载体,将表达USF1/USF2的重组逆转录病毒感染肺泡上皮细胞, 用Western印迹检测细胞GCLC蛋白表达受影响的情况,进一步确定E-box元件与USF作用在GCLC基因表达中的最终作用.结果 EMSA和超级迁移率变动试验证实GCLC基因负调控区域的功能元件是E-box,且该元件与USF特异结合参与GCLC基因的调控;共转染USF1/USF2表达质粒的细胞GCLC基因表达明显下降;Western印迹证实感染重组USF1/USF2逆转录病毒使肺泡上皮细胞的GCLC蛋白表达明显下降.结论 E-box元件通过与转录因子USF作用抑制GCLC基因表达,E-box元件是γ-GCS基因的重要的抑制元件.

关键词：谷氨酸-半胱氨酸连接酶、反应元件

所属期刊栏目：85

分类号：TN7;TM1

资助基金：中国科学院资助项目30170401;广东省自然科学基金000321

在线出版日期：2005-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：560-563