RNA干扰真核表达载体pEGFP-H1介导的血管内皮生长因子shRNA治疗人胶质瘤的实验研究

摘要：

目的构建针对血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(pEGFP-H1/VEGF),观察其在体内和体外对胶质瘤细胞株U251生长的抑制作用.方法应用PCR构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP-H1,并利用该载体介导VEGF shRNA.用阳离子脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP的表达,用RT-PCR检测VEGF mRNA的表达,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中VEGF蛋白的含量.同时筛选转染pEGFP-H1和pEGFP-H1/VEGF的U251稳定细胞株,制备裸鼠U251细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况.结果与空载体转染组相比, pEGFP-H1/VEGF对VEGF的抑制率达77.9%.对照组和pEGFP-H1组裸鼠肿瘤重量分别为1.7 g±0.4 g和1.5 g±0.7 g,体积分别为1573 mm3±330 mm3和1430 mm3±382 mm3,两组之间重量和体积差异均无统计学意义(P>0.05),而pEGFP-H1/VEGF组肿瘤重量为0.5 g±0.4 g,体积为401 mm3±272 mm3,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 pEGFP-H1介导的VEGF shRNA能有效抑制U251细胞中VEGF的表达,并在体内抑制肿瘤生长.

关键词：RNA、内皮生长因子、神经胶质瘤、基因疗法

所属期刊栏目：85

分类号：R73;R97

在线出版日期：2005-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：547-550