葡萄糖糖基神经酰胺合成酶特异性小干扰RNA表达载体的构建及其逆转乳腺癌细胞耐药的研究

摘要：

目的构建葡萄糖糖基神经酰胺合成酶 (GCS) 小干扰RNA表达载体,观察其对乳腺癌耐药细胞(MCF-7/ADR)GCS基因表达和耐药性的影响.方法设计合成2对GCS基因的特异性siRNA,分别定向克隆入真核表达载体pSUPER,构建pSUPER-GCS1和pSUPER-GCS2重组质粒,脂质体Lipofect AMINE 2000介导转染MCF-7/ADR细胞,空载体pSUPER转染作为对照,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析GCS mRNA的表达,流式细胞仪观察GCS蛋白的表达,四氮唑盐法检测阿霉素对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50),流式细胞技术检测细胞凋亡率的改变.结果酶切分析和测序证实成功构建了针对GCS的siRNA表达载体pSUPER-GCS1和pSUPER-GCS2.两对重组质粒均可特异性抑制GCS基因表达,转染后48 h GCS mRNA抑制率分别为89.4%、88.5%,GCS蛋白含量分别下降为8.3%±1.0%,9.2%±0.8%,四氮唑盐法显示重组质粒对阿霉素耐药性相对逆转率分别为93.7%、91.6%,明显提高了乳腺癌细胞对于阿霉素的药物敏感性,流式细胞仪结果表明细胞凋亡率增加为15.38±1.16,13.92±1.73,而空载体对照组无以上作用.结论 GCS特异性siRNA表达载体构建成功,且有效抑制了GCS基因表达,并通过诱导耐药细胞凋亡率增加,逆转乳腺癌细胞多药耐药.

关键词：葡糖转移酶类、RNA、乳腺肿瘤、抗药性、多药

所属期刊栏目：85

分类号：R73;TM7

资助基金：中国科学院资助项目30300124;广东省博士启动基金20020422042;山东省科技厅资助项目022130112

在线出版日期：2005-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：518-521