E1A激活基因阻遏子在不同表型血管平滑肌细胞中的表达

摘要：

目的探讨血管平滑肌细胞表型转换、分化过程中E1A激活基因阻遏子(cellularrepressor of E1A-stimulated genes,CREG)的表达变化及其相关机制.方法将PCR扩增的CREG片段插入pGEX-4T-1原核表达载体,纯化的CREG融合蛋白免疫家兔以制备多克隆抗体.以人胸廓内动脉平滑肌细胞(human internal thoracic artery smooth muscle cells,HITASY)为模型,[3H]标记脱氧胸苷掺入法测定去血清培养HITASY细胞DNA合成变化.以Western印迹观察HITASY细胞在去血清培养过程中SMα-肌动蛋白、肌钙结合蛋白(calponin)的表达,RT-PCR和Western印迹分析去血清培养诱导CREG mRNA和蛋白表达变化;免疫组化法观察CREG在细胞内的表达及定位.结果构建载体并成功得到抗CREG多克隆抗体.去血清培养可使HITASY细胞DNA合成明显降低.随去血清培养时间延长,除SMα-肌动蛋白和肌钙结合蛋白表达逐渐上调之外,CREG mRNA转录活性和蛋白翻译合成亦上调.免疫组化显示去血清培养后,CREG蛋白在细胞内表达并主要位于细胞核周.结论去血清能促使HITASY细胞由合成表型向收缩表型转换,同时伴CREG mRNA和蛋白表达上调.

关键词：阻遏蛋白质类、腺病毒E1A蛋白质类、肌、平滑、血管

所属期刊栏目：85

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金30070280

在线出版日期：2005-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：49-53