腺相关病毒介导的肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体的表达及其体外抗肿瘤活性的研究

摘要：

目的研究腺相关病毒(AAV)介导的重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL114-281)在体内外的表达规律及其杀伤肿瘤细胞的生物学活性,探讨重组腺相关病毒用于肿瘤基因治疗的应用前景.方法构建编码TRAIL胞外区114～281位氨基酸的多肽的重组腺相关病毒载体rAAV-TRAIL114-281,转染HEK293人胚肾细胞,获得高滴度的重组病毒颗粒后,转导人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat、人肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721以及人宫颈癌细胞株HeLa等,并采用经C57BL/6小鼠门静脉输入、皮下注射、肌内注射、腹腔注射或口服等不同给药途径,研究重组腺相关病毒介导的TRAIL114-281蛋白在体内外的表达规律.采用实时PCR方法测定重组病毒滴度.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)、Western印迹法和免疫组化法测定蛋白表达.采用MTT法测定重组rAAV-TRAIL114-281杀伤肿瘤细胞的生物学活性.结果成功地获得了rAAV-TRAIL114-281重组病毒,其滴度为每毫升7.5×1012基因组颗粒数(Gps/ml).重组病毒转导使TRAIL114-281在宿主细胞中高效表达,并可显著诱导Jurkat、HeLa和SMMC-7721等肿瘤细胞凋亡,但不能诱导HepG2细胞凋亡.体内实验中,经小鼠门静脉输入重组病毒,可使TRAIL114-281以三聚体的活性形式在肝细胞中分泌表达长达6个月.通过皮下注射、肌内注射、腹腔注射或口服等途径给药,均可在肝组织中检测到不同水平TRAIL114-281的表达,但在其他组织中未检测到外源TRAIL的表达.结论重组腺相关病毒AAV可介导TRAIL114-281在小鼠肝脏中长期、高效表达,其用于肿瘤特别是肝癌的基因治疗具有较高的应用前景.

关键词：腺相关病毒、肿瘤坏死因子、基因表达调控、基因疗法

所属期刊栏目：84

分类号：R39;R73

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA217111;国家自然科学基金30170362;北京市科委重大生物医药基金H010210200122

在线出版日期：2004-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1635-1641