10.3760/j:issn:0376-2491.2004.18.004
靶向表皮生长因子受体的小分子干扰RNA抑制TJ905人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的实验研究
目的比较靶向表皮生长因子受体(EGFR)的小分子干扰RNA与反义RNA构建体对TJ905人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用.方法选择人EGFR的二个siRNA靶序列构建靶向EGFR的siRNA表达质粒,并以反义EGFR RNA为对照进行脂质体介导的TJ905人脑恶性胶质瘤细胞系表达.应用免疫荧光和蛋白印迹检查EGFR的表达水平;应用TUNEL法分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期变化,MTT法分析细胞增殖;蛋白印迹检测基质金属蛋白酶9的表达,明胶酶谱分析MMP9酶活性,Transwell法分析侵袭能力.结果与TJ905细胞和转染空载体的TJ905细胞比较,转染反义EGFR RNA使EGFR表达下调82%,转染siRNA表达质粒组EGFR表达下调90%和92%.TJ905组和空载转染组几乎没有凋亡细胞,反义EGFR转染组与siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加(χ2=31.549,P<0.001);siRNA表达载体转染后S期指数较对照和反义RNA转染组细胞明显减少,与TJ905组和空载转染组比较,转染组细胞自第1天起存活率均明显下降(P<0.001),且反义组与siRNA表达载体转染组之间存活率差异有显著意义(P<0.01);同时蛋白印迹发现转染siRNA表达载体后MMP-9的表达明显下调,明胶酶谱分析发现在反义组与siRNA表达载体转染组MMP-9酶活性明显下降,以siRNA表达载体转染组最明显;同时Transwell细胞侵袭实验发现在反义组与siRNA表达载体转染组均有抑制作用,以siRNA表达载体转染组最显著.结论靶向EGFR 的siRNA表达质粒可以特异性地抑制EGFR的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭并诱导细胞凋亡,效果明显优于反义RNA.质粒介导的siRNA表达载体可以成为胶质瘤靶向性EGFR基因治疗的一种新策略.
受体、表皮生长因子、反义RNA、神经胶质瘤
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R73;O56
2004-12-09(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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1503-1508