腺病毒介导的全抗体基因治疗卵巢癌的实验研究

摘要：

目的探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用.方法构建携带曲妥珠单抗[Trastuzumab, 商品名:赫赛汀(Herceptin)]全抗体基因的腺病毒载体,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad-SG-Her,用Ad-SG-Her转染人正常肝细胞株L-02,判断体外肝细胞是否可以表达Herceptin抗体;将卵巢癌SK-OV-3细胞接种于裸鼠皮下,3 d后把40只成瘤裸鼠随机分为3个治疗组和1个对照组,每组各10只.治疗组裸鼠尾静脉分别注射不同滴度的Ad-SG-Her:治疗A组注射2×109空斑形成单位(pfu)/只,B组注射1×109pfu/只,C组注射5×108pfu/只.用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别在体外转染Ad-SG-Her后的第3天和第7天,以及裸鼠接受Ad-SG-Her治疗后的第3、7、10、14、21、28、35天检测Herceptin的表达量;通过间接免疫荧光法(IFA)和Western印迹法分别检测血清中的抗体与Her2过表达卵巢癌细胞株SK-OV-3结合的特异性以及所表达全长抗体的完整性;同时观察不同滴度的Ad-SG-Her对荷SK-OV-3实体瘤裸鼠的治疗作用.结果构建的带有全长Herceptin基因的重组腺病毒Ad-SG-Her,在体外及体内均能高效表达人源化抗体Herceptin.Western印迹显示:该人源化抗体与商品化Herceptin具有相同大小的轻链与重链,且浓度匹配,这表明它能够形成完整的抗体.IFA和ELISA可检测到表达的抗体能特异性地与细胞表面的Her2结合.Ad-SG-Her在裸鼠治疗的第3天开始表达抗体,7～10 d达高峰,持续表达约4周左右.治疗组A与B、C组之间的抗体表达量差异有显著意义(均P＜0.01),而B、C组之间差异无显著意义(P＞0.05).在治疗后的第3、7、10、14、21、28、35天,裸鼠体内抗体的表达量差异均有显著意义(P＜0.01).各组抗体表达量不同,表现的抗肿瘤的疗效差异也有显著意义(P＜0.01).从治疗后的第3天开始,裸鼠肿瘤大小在治疗A组与B、C组及对照组之间差异有显著意义(均P＜0.05),治疗A组对肿瘤细胞增殖的抑制作用明显,在治疗后观察的35 d内几乎看不到肿瘤的生长;治疗C组的肿瘤增长几乎没有受到影响(P＞0.05);治疗B组肿瘤增长受到一定的抑制,但与C组及对照组之间的差异无显著意义(P＞0.05).裸鼠体内抗体的表达及抗肿瘤疗效与注射的病毒剂量呈现明显的量效关系.结论腺病毒携带的Herceptin全抗体基因能够在动物体内高效表达与商品化Herceptin生物学活性近似的人源化全长抗体,且能持续较长时间的稳定表达,这表明应用全抗体基因治疗是一种可行的肿瘤治疗新方案.

关键词：抗体、基因、治疗、肿瘤、Herceptin

所属期刊栏目：84

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金30120160823

在线出版日期：2004-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1147-1151