遗传性凝血因子XIII缺陷症分子机制的研究

摘要：

目的研究两种遗传性凝血因子(FXIII) A基因的缺陷(FXIIIA Arg77→Cys,Ser413→Trp)以了解其致病的分子机制.方法构建正常人FXIIIA重组表达质粒(wt-PCI/FXIIIA),通过定点突变获得上述2种突变的FXIIIA重组表达质粒(mut-PCI/FXIIIA),并分别将它们转染到COS7细胞表达,PCR、RT-PCR和Western 印迹检测转染细胞中人FXIIIA的 DNA水平、RNA水平及其蛋白质的表达量.用脉冲追踪试验追踪人FXIIIA蛋白在细胞内的变化.通过生物素化戊胺的掺入检测细胞内、外人FXIIIA的活性.结果 wt-PCI/FXIIIA和mut-PCI/FXIIIA稳定转染的COS7细胞内FXIIIA在RNA水平表达量相同;而两种mut-PCI/FXIIIA转染的细胞内未检测到人FXIIIA蛋白质,且蛋白活性Ser413→Trp突变者仅为正常的8.7%,Arg77→Cys突变者则为0%.用脉冲追踪法显示正常FXIIIA蛋白质各时间点含量无减少,而两种突变的人FXIIIA在0.5 h和1 h虽存在,但很快消失.结论两种FXIIIA基因突变导致FXIIIA在细胞内不稳定,迅速被降解,从而FXIIIA蛋白量减少和活性丧失.

关键词：因子XIII、基因突变

所属期刊栏目：83

分类号：R55(血液及淋巴系疾病)

在线出版日期：2004-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2158-2161