胚胎干细胞向肝细胞定向诱导分化的体外实验研究

摘要：

目的探讨胚胎干细胞体外定向诱导分化为肝细胞的条件和机制.方法选用Balb/c小鼠胚胎干细胞,经过拟胚体发育分化5 d后开始定向诱导培养,将拟胚体转入白明胶处理的培养板中贴壁生长,在不同时间段分别在细胞培养基中添加酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、肝细胞生长因子(HGF)等细胞生长因子进行肝细胞定向诱导.细胞分化过程的形态学变化用倒置显微镜追踪观察;用放免法对细胞培养上清中抗小鼠甲胎蛋白(AFP)和抗小鼠白蛋白(ALB)进行动态检测,用免疫细胞化学法检测肝细胞分化标记物AFP,ALB,CK8,CK18,并计算其阳性表达率(肝细胞分化率).结果胚胎干细胞在重组小鼠白血病抑制因子(LIF)存在的情况下保持未分化生长状态,撤去LIF后很快发育为拟胚体并继续分化.在第8天检测到上清中AFP出现,浓度为3.4 ng/ml,ALB在第11天开始检测到,浓度为0.2μg/ml,随培养时间延长,AFP和ALB浓度逐渐增加.第8天分化细胞开始出现AFP阳性,第10天出现CK8、CK18阳性,第11天出现ALB阳性,阳性细胞结构符合正常肝细胞结构特点.计算分化细胞中ALB阳性细胞率,得到肝细胞的分化率为30%.结论胚胎干细胞经过拟胚体发育阶段,在特定培养条件和aFGF、HGF等生长因子的作用下,可定向分化为肝细胞,这种细胞分化系统有望成为肝细胞替代疗法中的新型肝细胞来源.

关键词：干细胞、肝细胞、细胞分化

所属期刊栏目：83

分类号：R32(人体形态学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2001CB510101;国家自然科学基金30230350

在线出版日期：2004-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1592-1596