参照链介导的构象分析策略在人类白细胞抗原-A基因位点分型中的临床应用

摘要：

目的建立并稳定人类白细胞抗原(HLA)分型新策略-参照链介导的构象分析(RSCA)系统;以HLA-A位点为靶标,鉴定RSCA分型策略的优劣.方法采用国际RSCA协作组提供的20例标准分型DNA首先确定RSCA系统的稳定性、准确性及可复性.然后分别提取84例拟进行造血干细胞移植病人及家系成员的外周血DNA,采用RSCA 和序列特异性引物体外基因扩增(PCR-SSP)法平行对照对HLA-A基因位点进行分型.结果对20例标准分型DNA 的分型结果显示,所获分型结果与国际RSCA协作组的完全一致,准确性及重复率均为100%.在全部84例移植病人及家系成员标本中,有82/84例(97.6%)标本可明确判定结果,其中有33/84例(39%)可直接指定等位基因型别;此外,还有2/84例(2.4%)标本因PCR扩增结果太弱,致使RSCA法未能获得分型结果.随机选择20例移植标本进行RSCA重复性实验表明,前后结果完全一致,然而在PCR-SSP分型中,约有10%的标本需要重复1～3次方能判定结果.结论 RSCA与PCR-SSP分型结果相比,具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、高通量和低成本的优点,非常适合于对拟进行非血缘异基因造血干细胞移植供-受体进行HLA分型.缺点则是对于单个分型标本而言所花时间较长,对DNA标本纯度要求较高,数据库尚需进一步完善.

关键词：HLA-A位点、RSCA、PCR-SSP、造血干细胞移植

所属期刊栏目：83

分类号：R457(治疗学)

资助基金：总后勤部医药卫生青年基金01Q048

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：654-657