新型重组免疫抑制蛋白B7-2-L-PE40KDEL的分子构建与生物活性及结构特性

摘要：

目的构建重组B7-2-L-PE40KDEL融合蛋白,特异性杀伤CD28高表达的T细胞,选择性阻断T淋巴细胞活化过程中的B7:CD28/CTLA-4共刺激信号系统,由此诱导免疫耐受,特异性防治移植物抗宿主疾病(GVHD)和宿主抗移植物疾病(HVGD).方法采用基因融合序列重叠延伸(SOE)策略,构建新型重组pRSETA-B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的原核表达载体,实现融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,利用亲和层析等方法进行蛋白质纯化.对该融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性等进行模拟分析.采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD28受体的T细胞的活性进行测定.结果构建并高效表达了B7-2-L-PE40KDEL融合蛋白,所获融合蛋白的纯度大于95% .该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示,其柔性及抗原性、亲水性表位均未显著改变.活性测定显示,该重组融合蛋白能有效特异性地杀伤高表达CD28的人T淋巴瘤细胞系,而对未表达CD28的人白血病细胞系则无任何杀伤.结论具有靶向性免疫抑制活性的新型重组B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的构建、表达对特异性防治GVHD和HVGD可能产生积极的影响.

关键词：淋巴细胞转化、外毒素类、移植物抗宿主病、免疫耐受

所属期刊栏目：82

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金39900187,30200111;军队医药卫生科研项目0985

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1541-1545