重组多功能抗凝多肽的表达及活性测定

摘要：

目的探讨多功能抗凝多肽基因的克隆、表达的可行性及其活性的测定.方法设计一个具有双重抗凝功能的重组多肽分子结构,它由谷胱甘肽-S-转移酶(GST)作为载体蛋白与重组抗凝多肽融合而成.编码重组抗凝多肽的DNA序列是根据氨基酸序列逆向翻译后经人工合成,并插入表达质粒pGEX-5X-3中,与其中的编码GST序列的3′端融合.采用大肠杆菌DH5α进行原核表达.应用亲和层析的方法得到纯化的融合蛋白.重组抗凝多肽含有31个氨基酸,由3个功能部分组成:(1)Lys-Gly-Asp(KGD)氨基酸序列,可抑制血小板GpⅡb/Ⅲa受体与纤维蛋白原的结合;(2)纤维蛋白单肽A的7-16残基(FBA7-16),是凝血酶的抑制剂.(3)水蛭素C末端的12肽,可直接抑制凝血酶.结果纯化的融合蛋白能抑制二磷酸腺苷诱导的血小板聚集(100 μmol/L时其活性为对照组的20.7%);随浓度增加而显著延长部分凝血活酶时间(80 μmol/L时凝血活酶时间为74.7 s)和凝血酶时间(80 μmol/L时为102.3 s)并抑制凝血酶的蛋白酶分解活性(100 μmol/L时活性为对照的11%).同时,也发现GST也有抗血小板作用,但其作用要明显弱于融合蛋白.结论通过基因重组的方法设计一具复合抗凝功能的多肽是可行的.

关键词：血小板聚集抑制剂、抗凝血酶类、水蛭素

所属期刊栏目：82

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金30070750,39600063;国家重点基础研究发展计划973计划G2000056905

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：593-596