β2糖蛋白I基因转染HEp-2细胞株中融合蛋白的表达及临床应用

摘要：

目的观察β2糖蛋白I(β2GP I)基因转染的HEp-2细胞(HEp-β2GP I)中β2GP I融合蛋白的过度表达.探讨以HEp-β2GP I为底物间接免疫荧光(IIF)法检测抗β2GP I抗体的可行性.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人源β2GP I cDNA,克隆入pEGFP-C1,并转染HEp-2细胞.通过RT-PCR、共焦荧光显微镜、免疫印迹法(IBT) 及IIF鉴定β2GP I-绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的表达和抗原性.以转染细胞为底物IIF检测19份疑诊继发性抗磷脂综合征(APS)病人、1份原发性APS病人及10份正常人血清的IgG-β2GP I,与同时进行的ELISA法检测IgG-ACL、IgG-β2GP I的结果作比较.结果 (1)获得的HEp-β2GP I细胞传十几代后仍具有较强的β2GP I-GFP表达,融合蛋白保持β2GP I的抗原性,其IIF表型具有特征性.(2)IIF法测血清IgG-β2GP I 的结果显示:7份病人血清出现特征性免疫荧光表型,而正常人血清均无荧光染色.3种方法的比较性研究显示IIF法测IgG-β2GP I与ELISA法测IgG-β2GP I的一致性程度最佳(Kappa值0.886).(3)HEp-β2GP I保持了原型HEp-2细胞检测抗核抗体(ANA)的荧光特性,且检出2例原型HEp-2细胞IIF ANA是阴性的血清.结论 HEp-β2GP I转染细胞株可用于IIF检测抗β2GP I,而且仍可作为常规IIF ANA检测的底物.

关键词：β2糖蛋白I、基因转染、HEp-2细胞、免疫荧光技术、自身抗体

所属期刊栏目：82

分类号：R446(诊断学)

资助基金：上海市教委资助项目984419073

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：413-417