CIZ1基因通过调控MEK-ERK1-2信号通路影响视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的实验研究

摘要：

目的 探讨锌指蛋白(CIZ)1基因影响视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖和凋亡的机制.方法 RB组织芯片购自西安艾丽娜生物科技有限公司,人神经母细胞瘤细胞系Y79购自美国ATCC公司.应用免疫组化方法检测CIZ1基因在RB肿瘤组织和正常视网膜组织中的表达情况;应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Western blot方法检测CIZ1基因在RB细胞中信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的表达水平.选取RB细胞系Y79细胞,采用数字表法随机分为对照组、干扰CIZ1基因组(shCIZ1)-1及shCIZ1-2等3组.采用不同的慢病毒分别感染阴性对照组和两组shCIZ1基因组细胞.应用荧光定量PCR及Western blot方法检测敲低效率;应用细胞增殖测量试剂盒(CCK8)方法检测细胞的生长、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3-7的活性和细胞凋亡相关蛋白表达的情况;通过Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)1-2信号通路相关蛋白的表达变化.CIZ1的基因表达量、蛋白表达水平、RB细胞的增殖倍数、Caspase3-7、MEK、p-MEK、ERK及p-ERK蛋白的表达水平,采用单样本K-S拟合优度法进行正态性检验,符合正态分布者以均数±标准差进行描述.多组样本间不同组间均数的比较采用重复测量资料的方差分析,采用LSD检验进行两两比较.结果 与正常视网膜组织相比,CIZ1基因在RB肿瘤组织中的表达水平显著上调;在RB细胞中,CIZ1基因mRNA水平及蛋白水平均显著高于正常人视网膜色素上皮细胞(ARPE),Y79细胞、人神经母细胞瘤细胞系(WERI-Rb)-1细胞中mRNA相对表达量分别为(0.061±0.001)、(0.041±0.001),与ARPE19细胞中mRNA相对表达量(0.025±0.001)相比,差异均具有统计学意义(t=41.58,18.68;P<0.05);慢病毒干扰CIZ1基因的表达可以显著降低CIZ1的mRNA与蛋白表达水平,shCIZ1-1组和shCIZ1-2 CIZ1组mRNA的相对表达量分别为(0.015±0.008)和(0.008±0.003),与对照组mRNA的相对表达量(0.032±0.003)相比,差异均具有统计学意义(t=3.72,5.357;P<0.05);敲低CIZ1基因可以显著抑制RB细胞的增殖,也可以抑制增殖相关基因即细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(t=21.18,21.80;P<0.05);同时还可以抑制增殖相关基因Cyclin E1蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(t=17.26,16.41;P<0.05).敲低CIZ1可以显著增强细胞凋亡相关蛋白Caspase3-7的活性,上调Caspase-3和Caspase-7蛋白的表达.Western blot检测敲低CIZ1基因对MEK-ERK1-2信号通路影响的结果显示,CIZ1下调可以显著抑制磷酸化的MEK的表达水平,与对照组相比差异具有统计学意义(t=3.925,8.461;P<0.05);CIZ1下调可抑制ERK1-2蛋白的磷酸化水平,与对照组相比差异具有统计学意义(t=14.12,28.36;P<0.05).结论 敲低CIZ1基因可以通过抑制MEK-ERK1-2信号通路抑制RB的生长.

关键词：视网膜母细胞瘤、CIZ1、增殖、凋亡、MEK-ERK1-2信号通路

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资助基金：北京市属医学科研院所公益发展改革试点项目;北京市医院管理中心"登峰"计划;首都医科大学附属北京同仁医院科研种子基金资助项目

在线出版日期：2020-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：198-205