神经干细胞与视网膜色素上皮细胞相关基因表达差异的实验研究

摘要：

目的：探讨神经干细胞（ NSC）与成熟视网膜色素上皮细胞（ RPE）间相关基因的表达差异。方法分离小鼠原代RPE并进行扩增培养。应用反转录-聚合酶链反应鉴定眼区发育相关基因在NSC和RPE的表达，分析相关差异。进一步应用荧光定量聚合酶链反应（ PCR）对共同表达的基因进行定量分析，比较两者差异。测量指标的数据资料以均数±标准差（ x珋±s）的形式表示；采用独立样本t检验的方法分别比较NSC和RPE间各基因表达量的差异。结果原代分离后的小鼠RPE细胞呈圆形生长，细胞内充满色素颗粒，一般48 h后，细胞可稳定贴壁生长，部分细胞呈双核或多核，并逐渐呈三角形或多边形状伸展。培养7 d左右，细胞生长接近融合状态，进行RPE细胞的特异蛋白免疫荧光染色，可见细胞角蛋白及S-100等显著表达。在眼区发育相关的主要转录因子中，NSC特异表达Sox2 mRNA，RPE细胞特异表达Chx10、Opn4及RPE65 mRNA，两者均表达nestin、Pax6、R、Mitf、Hes1、Zo-1及tublin mRNA。在NSC和RPE共同表达的相关基因中，Pax6、Mtif、Rx，Hes1及ZO-1在RPE的相对表达量都显著高于其在NSC的表达，差异有统计学意义（ t＝－16．751，－5．439，－8．109，－4．96，－9．172；P ＜0．05）。而nestin在两类细胞的表达比较，差异无统计学意义（t＝－0．328，P ＞0．05）。结论在NSC向RPE诱导分化过程中，Chx10、Opn4及RPE65具有一定特异性，可作为RPE的鉴定蛋白。 NSC和RPE存在共同表达的基因特性，但表达水平存在较大差异，可以在诱导分化过程中进行调控来促进RPE的定向分化。

关键词：神经干细胞、视网膜色素上皮细胞、基因表达、分化

分类号：S79;S63

在线出版日期：2015-01-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：313-317